СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ ЗАСОБУ З ГЕПАТОПРОТЕКТОРНОЮ ДІЄЮ НА ОСНОВІ ІОНІЗОВАНОГО ЕКСТРАКТУ ЛИСТЯ БРУСНИЦІ З L-АРГІНІНОМ

Спосіб одержання засобу з гепатопротекторною дією, що включає екстракцію рослинної сировини при співвідношенні 1:10, фільтрування і упарювання, який відрізняється тим, що як рослинну сировину використовують листя брусниці звичайної, подрібнюють сировину, екстрагують рослинну сировину однократно водним розчином L-аргініну з pH=12,5 у співвідношенні 1:10 протягом 30 хвилин на водяній бані при температурі 90 ºС, одержаний витяг відфільтровують, потім піддають концентруванню у вакуум-випарному апараті, при температурі 50-60 °C до співвідношення кількості екстракту і сировини 1:1. 1

Корисна модель належить до фармації і медицини, а саме до засобів, що містять біологічні активні речовини рослинного походження, зокрема до способу одержання засобу з гепатопротекторною дією на основі іонізованого екстракту листя брусниці з L-аргініном. В даний час відзначається зростання кількості хронічних захворювань печінки, і вони посідають одне з провідних місць серед причин непрацездатності та смертності населення у всьому світі. За даними American Liver Foundation, близько 100 мільйонів людей мають неалкогольну жирову хворобу печінки, 2,7 мільйона жителів мають діагноз хронічного гепатиту С [1]. Неалкогольна жирова хвороба печінки (НЖХП) охоплює спектр захворювань печінки, починаючи від простого стеатозу (накопичення жиру в печінці) до неалкогольного стеатогепатиту, фіброзу, цирозу та гепатоцелюлярної карциноми. Зі зростанням поширеності та відсутністю специфічної фармакотерапії, НЖХП є нагальною проблемою громадського здоров'я. Розуміння патофізіології НЖХП має вирішальне значення для розробки ефективних методів лікування та профілактичних стратегій. Печінка відіграє ключову роль у метаболізмі ліпідів. При НЖХП існує дисбаланс між засвоєнням та утилізацією ліпідів. Підвищене поглинання вільних жирних кислот, посилений de novo ліпогенез та знижене бета-окислення сприяють накопиченню ліпідів у гепатоцитах [2]. Листя брусниці звичайної є багатим джерелом фенольних сполук. Хімічний склад визначається переважно похідними галотанінів та флаван-3-олів. Галотаніни - це група гідролізованих танінів, мономер галотанінів - це естер глюкози та галової кислоти. Головними сполуками галотанінів є сангуін H-6, H-10 та ламбертіанін C. Основні представники похідних флаван-3-олів - це епікатехін та (+)-катехін [3]. Суттєву роль у фармакологічній активності речовини відіграє ступінь іонізації, оскільки іонізований член пари, завдяки своєму електричному заряду, має фізичні та хімічні властивості, які суттєво відрізняються від властивостей його нейтральної спряженої форми [4]. Для повної іонізації біологічно активних речовин використовувалась амінокислота L-аргінін. L-аргінін аліфатична основна - амінокислота. Є однією з двох умовно незамінних амінокислот (поряд з гістидином). Оптично активна, існує у вигляді L-і D-ізомерів. L-Аргінін входить до складу пептидів і білків, особливо високий вміст аргініну в основних білках - гістонах та протамінах (до 85 %). Відомий спосіб отримання поліфенольного комплексу "Флавітин" з протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною активністю з листя винограду сорту Дабуш [5], що включає екстракцію сировини 50 % спиртом етиловим, при співвідношенні сировина екстрагент 1:10 з подальшим упарюванням, фільтрацією, ресорбцією фенольних сполук з осаду водою, упарюванням і сушінням. До недоліків відомого способу можна віднести однократну екстракцію, яка не дозволяє досягнути максимального витягу із сировини поліфенольних сполук. Як найближчий аналог вибраний спосіб одержання засобу з протизапальною та антиоксидантною дією [6], що включає екстракцію листя абрикоса звичайного гарячою водою при співвідношенні 1:10 - 1:11 протягом 30 хвилин, фільтрують витяги, упарюють об'єднані витяги під вакуумом до співвідношення 1:1. До недоліків за найближчим аналогом можна віднести використання води, як екстрагенту, оскільки при даній екстракції екстрагується полісахариди, які не мають антиоксиданту дію, а лише збільшують масу сухого залишку екстракту, також при екстракції водою не екстрагується більша частка флавоноїдів. В основу корисної моделі поставлена задача розробки способу одержання засобу з гепатопротекторною дією на основі іонізованого екстракту листя брусниці з L-аргініном. Поставлена задача вирішується тим, що у способі одержання засобу з гепатопротекторною дією на основі іонізованого екстракту листя брусниці з L-аргініном, що включає подрібнення сировини, екстрагують рослинну сировину однократно водним розчином L-аргініну з pH=12,5 у співвідношенні 1:10 протягом 30 хвилин на водяній бані при температурі 90º С, одержаний витяг відфільтровують, потім піддають концентруванню у вакуум-випарному апараті при температурі 50-60 °C до співвідношення кількості екстракту до сировини 1:1. Приклад 1. 100 г листя брусниці звичайної, подрібненого до розміру часток 2-3 мм, поміщали в колби, заливали 1 літром розчином L-аргініну з pH=12,5 і екстрагували однократно протягом 30 хв на водяній бані при температурі 90º С, одержаний витяг відфільтровували, фільтрат упарювали за допомогою ротаційного вакуум-випарного апарата до об'єму 100 мл. Приклад 2. Дослідження гепатопротекторної активності проводили на експериментальній моделі тетрациклінового токсичного гепатиту. Експерименти проведені на 30 білих безпородних щурах-самцях з вихідною масою 180-200 гр., що містяться в лабораторному раціоні в умовах віварію протягом 15 днів. Їм вводили тетрациклін 500 мг/кг маси тіла ентерально 1 раз на добу протягом 5 днів. Як контрольну групу було взято інтактних щурів [7]. Усі тварини були розділені на 5 груп. Перша група - інтакт, друга група - контрольна патологія (тваринам всередину шлунка водили 0,5 мл/кг дистильованої води), третя група - препарат порівняння Карсил у дозі 8 мг/кг, четверта групи - іонізований екстракт листя брусниці у дозі 6,5 мг/кг (у перерахунку на суму фенольних сполук), п'ята група - іонізований екстракт листя брусниці у дозі 13,0 мг/кг (у перерахунку на суму фенольних сполук). Тварини під час експерименту перебували в умовах віварію при температурі (19-24)°С, вологості не більше 50 %, природному світловому режимі "день-ніч", у пластикових клітинах, на стандартному харчовому раціоні гранульованими кормами. Утримання та догляд за тваринами у віварій відповідали положенням Страсбурзької конференції. Поводження з тваринами проводилося відповідно до Європейської конвенції про захист хребетних тварин, що використовуються для експериментальних та інших наукових цілей [8]. Отримані результати обробляли статистичним методом варіаційних рядів з використанням критерію Манна-Уітні. Усі розрахунки велися за загальноприйнятими формулами. Результати представлені як M±m, де M - вибіркове середнє, m - помилка середнього. Результати вивчення гепатопротекторної активності засобу, одержаного за заявленим способом, наведені у таблиці. Таблиця Вплив іонізованого екстракту листя брусниці на біохімічні показники крові щурів при тетрацикліновому ураженню печінкиГрупа тваринДоза, мг/кгАлАт, мкмоль/год.*млАсАт, мкмоль/год.*млЗагальний білірубін, мкмоль/лЗагальний білок, ммоль/лХолестерин, ммоль/лКаталаза, ммоль/ (мин*л)Інтакт⸺0,70±0,071,70±0,1213,11±1,0068,44±5,481,41±0,1044,95±3,60Контрольна патологія⸺1,40±0,14*2,20±0,20*39,00±2,00*53,78±4,30*2,94±0,20*13,06±1,04*Карсил8,00,90±0,010*/**1,90±0,10*/**14,98±1,20*/**71,55±5,72/**1,65±0,10*/**29,73±2,38*/**Іонізований екстракт листя брусниці6,50,80±0,08**1,81±0,12**14,00±1,10**70,57±5,64**1,60±0,11**35,73±2,86*/**/#Іонізований екстракт листя брусниці13,00,70±0,07**/#1,70±0,15**11,94±1,12**75,30±6,02**1,30±0,10**43,54±3,48**/#Примітки: 1* - рівень статистичної значущості щодо групи ІК2. ** ⸺ значення достовірні відносно групи контрольної патології;3. # ⸺ значення достовірні відносно препарату порівняння Карсил; У тварин із моделлю токсичної гепатопатії відзначено виражені порушення показників цитолітичного, пігментного, білоксинтетичного та антиоксидантного статусу печінки (табл. 1). У групі контрольної патології рівні АлАт та АсАт зростали відповідно у 2,0 та 1,3 разу порівняно з інтактними тваринами (p<0,05), що свідчить про розвиток вираженого цитолізу гепатоцитів. Концентрація загального білірубіну підвищувалася до 39,00±2,0 мкмоль/л, а загальний білок знижувався до 53,78±4,30 ммоль/л, що вказує на порушення детоксикаційної та білоксинтетичної функцій печінки. Активність каталази зменшувалася більш ніж утричі (до 13,06±1,04 ммоль/(хв×л)), що відображає різке пригнічення антиоксидантної системи. Застосування Карсилу (8 мг/кг) супроводжувалося достовірним зниженням активності трансаміназ: рівні АЛаТ зменшувалися до 0,90±0,01, АСаТ - до 1,90±0,10 ммоль/год.×мл (p<0,05 відносно контрольної патології). Препарат також сприяв зниженню загального білірубіну більш ніж удвічі (14,98±1,20 мкмоль/л) та частковому відновленню синтетичної функції печінки, що підтверджувалося підвищенням загального білка до 71,55±5,72 ммоль/л. Активність каталази при цьому зростала до 29,73±2,38 ммоль/(хв×л), що вказує на відновлення антиоксидантного потенціалу. Іонізований екстракт листя брусниці проявив виражену дозозалежну гепатопротекторну активність. У дозі 6,5 мг/кг препарат суттєво знижував рівні АЛаТ та АСаТ (0,80±0,08 та 1,81±0,12, відповідно, p<0,05), нормалізував білірубін (14,00±1,10 мкмоль/л) та покращував білоксинтетичну функцію печінки (70,57±5,64 ммоль/л білка). Водночас активність каталази зростала до 35,73±2,86 ммоль/(хв×л), що перевищувало ефект Карсилу (p<0,05). Максимальний гепатопротекторний ефект спостерігався при застосуванні екстракту у дозі 13 мг/кг. Значення АЛаТ та АСаТ нормалізувалися до рівня інтактних тварин (0,70±0,07 та 1,70±0,15 ммоль/год.×мл, відповідно), а білірубін зменшувався до 11,94±1,12 мкмоль/л, що було достовірно нижче не лише від контрольної патології, а й від групи Карсилу (p<0,05). Показники загального білка підвищувалися до 75,30±6,02 ммоль/л. Особливо слід відзначити різке зростання активності каталази до 43,54±3,48 ммоль/(хв×л), що наближалося до рівня інтактних тварин і достовірно перевищувало антиоксидантний ефект Карсилу (p<0,05). Таким чином, іонізований екстракт листя брусниці виявив виражені мембраностабілізуючі, детоксикаційні та антиоксидантні властивості, що реалізуються через нормалізацію трансаміназ, покращення пігментного та білоксинтетичного обміну, а також відновлення активності антиоксидантних ферментів. У дозі 13 мг/кг препарат продемонстрував більш потужну гепатопротекторну дію, ніж Карсил, що може свідчити про його високий терапевтичний потенціал як засобу для корекції токсичних уражень печінки. Таким чином, заявлений спосіб одержання засобу з гепатопротекторною дією на основі іонізованого екстракту листя брусниці з L-аргініном. 1) простота та можливість проведення на стандартному обладнанні у промислових умовах України; 2) використання як екстрагента води, робить спосіб доступним, екологічно безпечним, дешевим, таким що не вимагає роботи з отруйними та шкідливими для здоров'я людини реактивами; 3) наявність вираженої гепатопротекторної активності іонізованого екстракту листя брусниці, одержаного за запропонованим способом; 4) перспективність використання одержаного екстракту як лікарської субстанції для одержання різних лікарських форм. Список використаних джерел 1. A pharmacovigilance study of the association between tetracyclines and hepatotoxicity based on Food and Drug Administration adverse event reporting system data / C. Wei et al. International Journal of Clinical Pharmacy. 2022. DOI: https://doi.org/10.1007/s11096-022-01397-5 (date of access: 07.12.2025). 2. Glenn C., Feldman S. R. Tetracycline-induced hepatotoxicity. Dermatology Online Journal. 2011. Vol. 17, no. 12. DOI: https://doi.org/10.5070/d31ds9v5z0 (date of access: 07.12.2025). 3. Study of total antioxidant capacity of red raspberry (Rubus idaeous L.) shoots / O.Y. Maslov et al. Vitae. 2023. Vol. 30, no. 1. DOI: https://doi.org/10.17533/udea.vitae.v30n1a351486 (date of access: 03.02.2024). 4. Mashkovsky M.D., Yakhontov L.N. Relationships between the chemical structure and pharmacological activity in a series of synthetic quinuclidine derivatives. Progress in drug research. Fortschritte der Arzneimittelforschung. Progres des recherches pharmaceutiques. 1969. No. 13. P. 293-339. 5. Спосіб одержання поліфенольного комплексу "Флавітин" з протизапальною, анальгетичною, противиразковою та антиоксидантною активністю: патент України 59681 A, МПК A61K 36/87, A61K 127/00, C11B 1/10, A61P 29/00, A61P 39/06. № 2002119121; заявл. 15.11.2002; опубл. 15.09.2003, Бюл. № 9. 8 с. 6. Спосіб одержання засобу з протизапальною та антиоксидантною дією: патент України 41772, МПК A61K 36/736. № u2008114477; заявл. 15.12.2008; опубл. 10.06.2009, Бюл. № 11. 8 с. 7. Доклинические исследования лекарственных средств: метод. руководство: навч. посіб. / ред. О.В. Стефанов. Киев: Вид. дом "Авиц.", 2001. 528 с. 8. Directive 2010/63/EU of the European Parliament and of the Council of 22 September 2010 on the protection of animals used for scientific purposes. OJEU2010; L276: 33-79.