СПОСІБ ОДЕРЖАННЯ КОМПОЗИЦІЇ КАТЕХІНУ З АНТИБАКТЕРІАЛЬНИМИ ПРЕПАРАТАМИ ДЛЯ ЗНИЖЕННЯ РЕЗИСТЕНТНОСТІ ГРАМНЕГАТИВНИХ ШТАМІВ ЗА ОСОЛОДЧЕНКО

Спосіб одержання композиції катехіну з антибактеріальними препаратами для зниження резистентності грамнегативних штамів, який включає взяття наважки 0,29 г (+)-катехіну та 0,44 г доксицикліну, 0,47 г гентаміцину, 0,75 кларитроміцину, 0,75 г азитроміцину, 0,32 г хлорамфеніколу, 0,22 г орнідазолу, 0,48 г цефепіму, 0,55 г цефтріаксону, 0,44 г меропенену, 0,30 г флуконазолу, 0,37 г левофлоксацину, перенесення кожної наважки у мірну колбу об'ємом 50,00 мл, розчинення у водно-спиртовому розчині, доведення до мітки тим же самим розчинником, приготування 0,01 М розчину у молярному співвідношенні катехіну та антибактеріального препарату 1:1.

Корисна модель належить до фармації та медицини і може бути використана при комплексному лікуванні інфекційних захворювань. Боротьба з інфекціями продовжує залишатися одним із пріоритетних завдань у галузі біології та охорони здоров'я в усьому світі, і антибактеріальні препарати, які на сьогодні складають одну з найбільш чисельних груп лікарських засобів, посідають провідні позиції у цій боротьбі [1]. На сьогодні антимікробна резистентність є проблемою номер один у всьому світі. Офіційно не опубліковано статистичних даних щодо резистентних штамів бактерій, які були виділені з бойових поранень під час поточного конфлікту в Україні. Однак у період з 2014 по 2020 роки статистика показала, що рівень виявлення мультирезистентних штамів бактерій у бойових пораненнях був значно вищим, ніж у цивільних лікарнях [2]. Крім цього, за останніми даними виявлено, що, Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae є домінуючими серед усіх виділених збудників. Серед усіх грамнегативних бактерій, 71,3 % були резистентними до антибіотика карбапенему, який є останньою "лінією захисту" проти резистентних штамів [3]. У березні 2022 року Європейський центр профілактики та контролю захворювань повідомив, що українські біженці з травматичними ранами можуть мати резистентні штами Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae надав рекомендації щодо виділення ізолятів та проведення скринінгових досліджень [4]. У німецькій клініці у Франкфурті-на-Майні співробітники повідомили про лікування травматичних ран у 103 українських пацієнтів у період з березня по червень 2022 року. Серед усіх госпіталізованих пацієнтів у 17 % були резистентні грамнегативні штами бактерій [5]. Таким чином, у світлі даних про швидке поширення резистентних штамів бактерій необхідний пошук нових способів підвищення чутливості резистентних грамнегативних штамів: Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae. (+)-катехін, є флаван-3-олом, міститься у великій кількості зеленого чаю. Він продемонстрував низку фармакологічних властивостей, включаючи антиоксидантну, цитопротекторну, вазопротекторну, протиракову, нейропротекторну та кардіопротекторну дії. Механізм протимікробної дії (+)-катехіну на сьогоднішній день до кінця не вивчений. Однак останні дослідження показали, що (+)-катехін може руйнувати бактеріальну мембрану, впливати на внутрішньоклітинні процеси синтезу необхідних білків та пригнічує дезоксирибонуклеїнову кислоту-гіразу (ДНК-гіразу) [6]. Основною причиною резистентності бактерій полягає в мутаціях, які змінюють дію антибіотика за допомогою одного з таких механізмів: - модифікації антимікробної мішені (зниження спорідненості до препарату); - зниження поглинання протимікробних препаратів; - активація механізмів відтоку видалення антибіотика; - глобальні зміни у важливих метаболічних шляхах. Найближчого аналога корисної моделі не було знайдено. В основу корисної моделі поставлена задача розробити спосіб одержання композиції катехіну з антибактеріальними препаратами для зниження резистентності грам-негативних штамів, а саме: Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae. Поставлена задача вирішується тим, що у способі одержання композиції катехіну з доксицикліном, гентаміцином, кларитроміцином, азитроміцином, хлорамфеніколом, орнідазолом, цефепімом, цефтріаксоном, меропененом, флуконазолом, левофлоксацином для зниження резистентності штамів Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae, який включає взяття точної наважки 0,29 г катехіну та 0,44 г доксицикліну, 0,47 г гентаміцину, 0,75 кларитроміцину, 0,75 г азитроміцину, 0,32 г хлорамфеніколу, 0,22 г орнідазолу, 0,48 г цефепіму, 0,55 г цефтріаксону, 0,44 г меропенену, 0,30 г флуконазолу, 0,37 г левофлоксацину, перенесення кожної наважки у мірну колбу об'ємом 50,00 мл, розчинення у водно-спиртовому розчині, доведення мітки тим же самим розчинником, приготування 0,01 М розчину у молярному співвідношенні катехіну та антибактеріального препарату 1:1. Загалом можна виділити шість основних ферментних структур, які є головними для грамнегативних резистентних штамів Pseudomonas aeruginosa, Enterobacter cloacae, Acinetobacter baumannii, Klebsiella pneumoniae це ДНК-гіраза, дигідрофолатредуктаза (ДГФР), деацетилаза, ацил-гомосериналлактонсинтаза (AHS) LasI, ацил-гомосериналлактонсинтаза (AHS) RhI, дигуанілатциклаза. ДНК-гіраза відповідає за реплікацію клітини бактерії, ДГФР важлива задля утворення фолієвої кислоти, деацетилаза - відповідає за утворення мембрани, AHS LasI та AHS RhI - ферменти, які є ключовими у випадку утворення біоплівки, а, у свою чергу, дигуанілатциклаза - інгібує процес клітинної адгезії бактерії. Для повного пригнічення резистентних штамів бактерії потрібно інгібувати усі перераховані ферменти. Корисна модель пояснюється прикладами. Приклад 1. Для теоретичної оцінки антибактеріальної активності катехіну та доксицикліну, гентаміцину, кларитроміцину, азитроміцину, хлорамфеніколу, орнідазолу, цефепіму, цефтріаксону, меропенену, флуконазолу, левофлоксацину було використано метод молекулярного докінгу. Для проведення цього дослідження було використано комп'ютерну програму Autodock 4.2 MGL Tools. Для дослідження антибактеріальної активності проти грамнегативних штамів було вибрано ферменти: ДНК-гіраза (PDB ID: 1kij), ДГФР (PDB ID: 1rx3), деацетилаза (утворення мембрани) (PDB ID: 3uhm), AHS LasI (PDB ID: 1RO5), AHS RhI (1KZF), дигуанілатциклаза (3BRE) дані структури ферментів були взяті з банку даних білка (БДБ) [7]. За допомогою Computed Atlas for Surface Topography of Proteins [8] були визначені амінокислоти в активному центрі ферменту відповідних за його інгібування. Для дослідження було взято доксициклін (CID_54671203), гентаміцин (CID_3467), кларитроміцин (CID_84029), азитроміцин (CID_447043), хлорамфенікол (CID_5959), орнідазол (CID_28061), цефепім (CID_5479537), цефтріаксон (CID_5479530), меропенен (CID_441130), (CID_44144393), флуконазол (CID_3365), левофлоксацин (CID_149096) та катехін (CID_9064), 3D-структура даних сполук були взяті з PubChem [9]. Комп'ютерною програмою Autodock 4.2 MGL Tools була використана для оптимізації структури ферментів шляхом видалення води, зайвих атомів, і додавання водневих груп. Потім AutoGrid визначило нативне розміщення ліганду для зв'язування з активним центром ферменту шляхом розкладення координати сітки (X, Y і Z). Зв'язування ліганду з ферментом проводили шляхом регулювання параметрів генетичного алгоритму (ГА), використовуючи 10 запусків критеріїв ГА. Для оцінки ефективності рівня зв'язування були використані наступні показники Е (Енергія зв'язку, ккал/моль) і IC50, (концентрація речовини, яка інгібує 50 % ферменту, ммоль). У випадку показника Е, чим менше значення, тим краще зв'язок між лігандом і ферментом. Для розуміння рівня селективності інгібування досліджуваних речовин до активних центрів бактеріальних ферментів ми застосували таку класифікацію селективності [11]: IC50 < 0,001 мМ (висока селективність); 0,05 > IC50 > 0,01 (середньоселективний); IC50 >0,05 мМ (низька селективність) [10]. Приклад 2. Вивчали антимікробну активність методом дифузії в агар відносно до наступних резистентних штамів: Pseudomonas aeruginosa 18, Enterobacter cloacea 17, Klebsiella pneumoniae 18, Acinetobacter baunanii 150. Ізоляти з клінічних зразків, включаючи аспірат трахеї та бронхоальвеолярний лаваж, були надані Інститутом мікробіології та імунології імені Мечникова НАМН України, Харків. Усі штами зберігаються та приймаються завідувачем музею сортів - О.Г. Перетятко. Pseudomonas aeruginosa 18, Klebsiella pneumoniae 18, Enterobacter cloaceae 17, Acinetobacter baunanii 150 були прийняті 01 листопада 2022 року. Метод дифузії препарату в агар проводили "колодязями". Визначення активності антибактеріальних препаратів проводили на двох шарах щільного поживного середовища, розлитого у чашки Петрі. У нижньому шарі використали "голодні" не засіяні середовища (агар-агар, води, солі). Нижній шар є підкладкою з 10 мл "голодного агару", на яку строго горизонтально встановлюють 3-6 тонкостінних циліндра з нержавіючої сталі діаметром 8 мм і заввишки 10 мм. Навколо циліндрів заливають верхній шар, що складається з поживного агаризованого середовища, розплавленого і охолодженого до 40 °C, у яке вносили відповідний стандарт добової культури тест-штамів. Заздалегідь, верхній шар добре перемішувався до утворення однорідної маси. Після застигання циліндри стерильним пінцетом витягали і в лунки, що утворилися, поміщали випробовувані препарати. Об'єм середовища для верхнього шару коливався від 14 до 16 мл. Чашки підсушували 30-40 хв при кімнатній температурі і ставили у термостат на 18-24 годин. При оцінці антимікробних та протигрибкових властивостей препаратів застосовували наступні критерії: - відсутність зон затримки росту штамів навколо лунки, а також зони затримки до 10 мм вказує на те, що штами є не чутливими до внесеного в лунку досліджуваного препарату місцевої дії; - зони затримки росту діаметром 10-15 мм вказують на малу чутливість штамів до препарату місцевої дії; - зони затримки росту діаметром 15-25 мм розцінюються, як показник чутливості штамів до препарату місцевої дії; - зони затримки росту, діаметр яких перевищує 25 мм, свідчить про високу чутливість штамів до препарату місцевої дії. Для отримання достовірних даних для здійснення висновку відносно ефективності препаратів було зроблено три незалежні випробовування (число повторів досліджень). Дані випробувань антибактеріальної активності викладені у Таблиці 7. Приклад 3. Взяття наважки 0,29 г (+)-катехіну та 0,44 г доксицикліну, 0,47 г гентаміцину, 0,75 кларитроміцину, 0,75 г азитроміцину, 0,32 г хлорамфеніколу, 0,22 г орнідазолу, 0,48 г цефепіму, 0,55 г цефтріаксону, 0,44 г меропенену, 0,30 г флуконазолу, 0,37 г левофлоксацину, перенесення кожної наважки у мірну колбу об'ємом 50,00 мл, розчинення у водно-спиртовому розчині, доведення мітки тим же самим розчинником, приготування 0,01 М розчину у молярному співвідношенні (+)-катехіну та антибактеріального препарату 1:1. Таблиця 1Результати молекулярного докінгу (+)-катехіну таантибактеріальних препаратів зі структурою ДНК-гірази№ЛігандДНК-гіразаΔGbinda (ккал/моль)Kib (ммоль)Рівень селективності1.Доксициклін-11,590,0000000032Високоселективний2.Кларитроміцин-11,590,00000001087Високоселективний3.Азитроміцин-10,290,00000061435Високоселективний4.Левофлоксацин-8,690,00042853Високоселективний5.Цефепім-8,270,00086Високоселективний6.Ципрофлоксацин-8,060,00123Середньоселективний7.Флуконазол-7,610,00266Середньоселективний8.Меропенем-7,130,00589Середньоселективний9.(+)-катехін-6,600,01464Середньоселективний10.Цефтазидим-6,480,01776Середньоселективний11.Хлорамфенікол-6,380,02114Середньоселективний12.Орнідазол-5,070,19214Низькоселективний13.Цефтріаксон-4,610,41631Низькоселективний14. Гентаміцин -4,081,03НизькоселективнийПримітка: a -– енергія вільного зв'язку; b - константа інгібування, IC50, ммоль Таблиця 2Результати молекулярного докінгу (+)-катехінута антибактеріальних препаратів зі структурою ДГФР№ЛігандДГФРΔGbinda (ккал/моль)Kib (ммоль)Рівень селективності1.Кларитроміцин-16,780,000000000504Високоселективний2.Азитроміцин-14,500,00000002336Високоселективний3.Доксициклін-11,590,00000319Високоселективний4.Цефтазидим-9,490,00011119Високоселективний5.Флуконазол-9,080,00022169Високоселективний6.Левофлоксацин-8,980,00026376Високоселективний7.(+)-катехін-8,520,00056708Високоселективний8.Ципрофлоксацин-8,440,00064808Середньоселективний9.Цефепім-8,370,00072803Високоселективний10.Хлорамфенікол-7,970,00143Середньоселективний11.Меропенем-7,650,00249Середньоселективний12.Гентаміцин -6.780,01073Середньоселективний13.Цефтріаксон-6.360,02164Середньоселективний14.Орнідазол-4.950,23625НизькоселективнийПримітка: a - енергія вільного зв'язку; b - константа інгібування, IC50, ммоль Таблиця 3Результати молекулярного докінгу (+)-катехінута антибактеріальних препаратів зі структурою деацетилазою№ЛігандДеацетилазаΔGbinda (ккал/моль)Kib (ммоль)Рівень селективності1.Азитроміцин-14,040,000000051Високоселективний2.Кларитроміцин-13,980,000000057Високоселективний3.Доксициклін-11,030,00000816Високоселективний4.Цефтазидим-10,370,00002509Високоселективний5.Цефепім-8,770,00037448Високоселективний6.Левофлоксацин-8,340,00077565Високоселективний7.(+)-катехін-7,570,00284Середньоселективний8.Ципрофлоксацин-7,510,00313Середньоселективний9.Гентаміцин -7,450,00346Середньоселективний10.Флуконазол-7,440,00353Середньоселективний11.Хлорамфенікол-7,190,00536Середньоселективний12.Меропенем-6,370,01163Середньоселективний13.Цефтріаксон-6,090,03444Середньоселективний14.Орнідазол-5,320,12638НизькоселективнийПримітка: a - енергія вільного зв'язку; b - константа інгібування, IC50, ммоль Таблиця 4Результати молекулярного докінгу (+)-катехінута антибактеріальних препаратів зі структурою AHS LasI№ЛігандAHS LasIΔGbinda (ккал/моль)Kib (ммоль)Рівень селективності1. Хлорамфенікол-10,760,00001304Високоселективний2. (+)-катехін-9,110,0002103Високоселективний3. Флуконазол-8,120,00111Високоселективний4. Цефтріаксон-6,560,01561Середньоселективний5. Орнідазол-5,830,05331Низькоселективний6. Доксициклін-4,990,22146Низькоселективний7. Левофлоксацин-4,110,97221Низькоселективний8. Меропенем-3,901,40Низькоселективний9. Ципрофлоксацин-2.4116,98Низькоселективний10. Гентаміцин ⸺⸺Неактивний11. Кларитроміцин⸺⸺Неактивний12. Азитроміцин⸺⸺Неактивний13. Цефепім⸺⸺Неактивний14. Цефтазидим⸺⸺НеактивнийПримітка: a - енергія вільного зв'язку; b - константа інгібування, IC50, ммоль Таблиця 5Результати молекулярного докінгу (+)-катехіну таантибактеріальних препаратів зі структурою AHS RhI№ЛігандAHS RhIΔGbinda (ккал/моль)Kib (ммоль)Рівень селективності1. Кларитроміцин-18,540,0000000000253Високоселективний2. Доксициклін-10,990,00000881Високоселективний3. Азитроміцин-10,160,00003572Високоселективний4. Флуконазол-8,350,00075818Високоселективний5. (+)-катехін-8,010,00133Середньоселективний6. Ципрофлоксацин-7,840,00178Середньоселективний7. Левофлоксацин-6,620,01408Середньоселективний8. Цефтазидим-6,430,0193Середньоселективний9. Хлорамфенікол-5,880,04912Середньоселективний10. Орнідазол-5,200,15405Низькоселективний11. Цефепім-5,050,19772Низькоселективний12. Меропенем-4,800,30528Низькоселективний13. Цефтріаксон-4.480,51643Низькоселективний14. Гентаміцин ⸺⸺НеактивнийПримітка: a - енергія вільного зв'язку; b - константа інгібування, IC50, ммоль Таблиця 6Результати молекулярного докінгу (+)-катехіну таантибактеріальних препаратів зі структурою дигуанілатциклазою№ЛігандДигуанілатциклазаΔGbinda (ккал/моль)Kib (ммоль)Рівень селективності1. Доксициклін-9,140,00019913Високоселективний2. Цефтазидим-8,060,00124Середньоселективний3. Кларитроміцин-8,030,00131Середньоселективний4. (+)-катехін-7,240,00491Середньоселективний5. Хлорамфенікол-6,590,01488Середньоселективний6. Флуконазол-6,450,01867Середньоселективний7. Меропенем-6,350,02203Середньоселективний8. Ципрофлоксацин-6,310,02356Середньоселективний9. Левофлоксацин-5,320,12516Низькоселективний10. Цефтріаксон-5,190,15567Низькоселективний11. Орнідазол-4,720,34569Низькоселективний12. Гентаміцин -4,490,51373Низькоселективний13. Цефепім-4,400,593Низькоселективний14. Азитроміцин-2,798,97НизькоселективнийПримітка: a - енергія вільного зв'язку; b - константа інгібування, IC50, ммоль Таблиця 7Схематичний поділ (+)-катехіну та антибактеріальних препаратів на дві категорії№РечовинаДНК-гіразаДГФРДеацетилазаAHS LasIAHS RhIДигуанілатциклазою1(+)-катехін#•#•##2Гентаміцин ⸺##⸺⸺⸺3Доксициклін•••⸺••4Кларитроміцин•••⸺•5Азитроміцин•••⸺•⸺6Хлорамфенікол###•##7Цефтріаксон⸺###⸺⸺8Орнідазол⸺⸺⸺⸺⸺⸺9Ципрофлоксацин###⸺10Цефепім•••⸺⸺⸺11Цефтазидим#••⸺12Меропенем###⸺⸺13Левофлоксацин•••⸺⸺14Флуконазол#•#••#Примітка: •- високий рівень селективності; # - середній рівень селективності; ⸺ низький або неактивний рівень селективності. Таблиця 8Діаметр інгібування (мм), отриманий у результаті скринінгу антимікробного ефекту проти резистентних штамів P. aeruginosa, E. cloacea, A. baumannii, K. pneumoniae за допомогою методу дифузії в агарі з (+)-катехіном і антибактеріальних препаратів (X±SD)Досліджуваний зразокКонцентрація, ммольK. pneumoniae 18P. aeruginosa 18E. cloacea 17A. baumannii150(+)-катехін0,00323,0±0,222,0±0,323.0±0,321,0±0,3Гентаміцин 0,003РістРіст17.0±0,317,5±0,3(+)-катехін +Гентаміцин 0,003+0,00325,0±0,326,0±0,327,0±0,324,0±0,3Доксициклін0,00315,0±0,3Ріст16,0±0,317,0±0,3(+)-катехін + Доксициклін0,003+0,00324,0±0,325,0±0,324,0±0,224,0±0,3Кларитроміцин0,003РістРістРістРіст(+)-катехін + Кларитроміцин0,003+0,00325,0±0,327,0±0,327,0±0,325,0±0,3Азитроміцин0,003РістРістРістРіст(+)-катехін + Азитроміцин0,003+0,00325,0±0,327,0±0,227,0±0,226,0±0,3Хлорамфенікол0,003Ріст12,5±0,219,5±0,2Ріст(+)-катехін + Хлорамфенікол0,003+0,00327,0±0,228,0±0,326,0±0,226,0±0,3Орнідазол0,003РістРістРіст10,0±0,2(+)-катехін + Орнідазол0,003+0,00324,0±0,227,0±0,325,0±0,227,0±0,3Цефепим0,003РістРістРістРіст(+)-катехін + Цефепім0,003+0,00325,0±0,324,0±0,227,0±0,326,0±0,2Цефтріаксон0,003+0,003РістРістРістРіст(+)-катехін + Цефтріаксон0,003+0,00326,0±0,327,0±0,227,0±0,227,0±0,3Меропенем0,003РістРістРіст16,0±0,2(+)-катехін + Меропенем0,003+0,00328,0±0,328,0±0,228,0±0,226,0±0,3Левофлоксацин0,003РістРіст23,5±0,220,5±0,2(+)-катехін + Левофлоксацин0,003+0,00325,0±0,225,0±0,326,0±0,226,0±0,2Флуконазол0,003РістРістРіст13,5±0,2(+)-катехін + Флуконазол0,003+0,00325,0±0,227,0±0,226,0±0,225,0±0,3 За результатами дослідженнями отриманими у Таблицях 1, 2, 3, 4, 5, 6 було встановлено, що (+)-катехін є високоселективним інгібітором ДГФР і AHS LasI. У Таблиці 7 відображено схематичний поділ (+)-катехіну та антибактеріальних препаратів на три категорії: перша категорія - це інгібітори, які є високоселективними, друга категорія - це інгібітори, які є середньоселективними, та третя категорія - низькоселективними. Відповідно, до даної схеми можна зробити висновок, що не існує ідеального антибактеріального препарату. У даному випадку, антибактеріальні засоби є низькоселективними або неактивними інгібіторами по ряду механізмів. У Таблиці 8 показано результати антибактеріальної дії (+)-катехіну, антибактеріальних препаратів та комбінації (+)-катехіну і антибактеріальних препаратів у молярному співвідношенні 1:1. Результати дослідження показали, що (+)-катехін пригнічує ріст резистентних штамів бактерій. У свою чергу, при комбінації (+)-катехіну і антибактеріальних препаратів було показано зняття резистентності та підвищення антибактеріальних властивостей. Також, було встановлено, що навіть флуконазол у комбінації з (+)-катехіном почав активно пригнічувати резистентні штами. Встановлено, що комбінація (+)-катехіну та антибактеріальної дії у молярному співвідношенні 1:1 є оптимальним. Таким чином, при комбінації двох речовин, які мають різні механізми дії, антибактеріальна дія препаратів підвищилась і резистентні штами стали чутливими до дії антибактеріальних препаратів. Спосіб одержання композиції (+)-катехіну з антибактеріальними препаратами для зниження резистентності штамів A. baumannii, P. aeruginosa, E. cloacea і K. pneumoniae має ряд суттєвих переваг: 1) простота та можливість проведення на стандартному обладнанні у промислових умовах України; 2) (+)-катехін є не токсичним, на території Україні є сировина база для його одержання; 3) наявність вираженої антибактеріальної дії, одержаного за заявленим способом; 4) перспективність використання даної композиції у створенні нових та модифікації вже відомих лікарських засобів. Джерела інформації: 1. Multidrug-Resistant and Virulent Organisms Trauma Infections: Trauma Infectious Disease Outcomes Study Initiative / K. Mende et al. Military Medicine. 2022. Vol. 187, Supplement_2. P. 42-51. DOI: https://doi.org/10.1093/milmed/usab131 (date of access: 24.07.2024). 2. Phenotypic and genotypic characterization of antibiotic resistance in military hospital-associated bacteria from war injuries in the Eastern Ukraine conflict between 2014 and 2020 / V. Kondratiuk et al. Journal of Hospital Infection. 2021. Vol. 112. P. 69-76. DOI: https://doi.org/10.1016/j.jhin.2021.03.020 (date of access: 24.07.2024). 3. Petrosillo N., Petersen E., Antoniak S. Ukraine war and antimicrobial resistance. The Lancet Infectious Diseases. 2023. DOI: https://doi.org/10.1016/s1473-3099(23)00264-5 (date of access: 24.07.2024). 4. WHO Regional Office for Europe (WHO/Europe)/European Centre for Disease Prevention and Control (ECDC). Antimicrobial resistance surveillance in Europe 2022–2020 data. Copenhagen: WHO/Europe; 2022. Available at: https://www.ecdc.europa.eu/sites/default/files/documents/ECDC-WHO-AMR-report.pdf. 5. Molecular surveillance of multidrug-resistant Gram-negative bacteria in Ukrainian patients, Germany, March to June 2022 / T. Schultze et al. Eurosurveillance. 2023. Vol. 28, no. 1. DOI: https://doi.org/10.2807/1560-7917.es.2023.28.1.2200850 (date of access: 24.07.2024). 6. Ganeshpurkar A., Saluja A. K. The Pharmacological Potential of Rutin. Saudi Pharmaceutical Journal. 2017. Vol. 25, no. 2. P. 149–164. URL: https://doi.org/10.1016/j.jsps.2016.04.025 (date of access: 01.06.2025). 7. RCSB PDB: Homepage. RCSB PDB: Homepage. Access at: https://www.rcsb.org/. 8. PubChem. Access at: https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/ 9. CASTp 3.0: Computed Atlas of Surface Topography of proteins. Access at: http://sts.bioe.uic.edu/castp/index.html?2011. 10. Kondža M., Brizić I., Jokić S. Flavonoids as CYP3A4 Inhibitors In Vitro. Biomedicines. 2024. Vol. 12, no. 3. P. 644. DOI: https://doi.org/10.3390/biomedicines12030644 (date of access: 24.07.2024).