ВесьБізнес
ВН
Зареєстровано · винахід

СПОСІБ МОДУЛЮВАННЯ РОЗМІРУ НАСІННЯ ТА ОРГАНІВ У РОСЛИН

Класифікація C07K14/415

20 зображень ↓
Номер реєстрації№ 130939
Дата подання25 вересня 2019
Реєстрація25 червня 2026
КласC07K14/415

ОФІЦІЙНІ ВІДОМОСТІ

Винахід

оновлено 10.07.2026
Назва
СПОСІБ МОДУЛЮВАННЯ РОЗМІРУ НАСІННЯ ТА ОРГАНІВ У РОСЛИН
Номер реєстрації
130939
Номер заявки
a201909987
Стан запису
Винаходи · код 2
Дата подання
25 вересня 2019
Дата реєстрації
25 червня 2026
Дата публікації
Не оприлюднено
Класифікація
A01H3/00, A01H5/08, A01H5/10, C07K14/415, C12N15/52, C12N15/82

КОРОТКИЙ ОПИС

Реферат

Винахід належить до експресії білка DA1 з мутацією, яка порушує або інактивує LIM-домен або LIM-подібний домен, у клітинах рослини. Дана експресія може збільшити врожайність або підсилити пов'язану з врожайністю ознаку рослини. Запропоновані способи, рослини та клітини рослин.

Показати формулу
1. Спосіб збільшення розміру насінини або маси насіння на одиницю площі рослини в рослині, який включає: експресію мутантного білка DA1 у клітинах зазначеної рослини, причому мутантний білок DA1 містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 80 % ідентичності з послідовністю DA1, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NOS: 4-27; зазначений мутантний білок DA1 має: (i) одну або більше змін послідовності в LIM-домені, що відповідає залишкам з 141 по 193 SEQ ID NO: 4, залишкам з 123 по 175 SEQ ID NO: 5, залишкам з 155 по 207 SEQ ID NO: 6, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 7, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 8, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 9, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 10, залишкам з 121 по 173 SEQ ID NO: 11, залишкам з 119 по 171 SEQ ID NO: 12, залишкам з 122 по 174 SEQ ID NO: 13, залишкам з 125 по 177 SEQ ID NO: 14, залишкам з 516 по 568 SEQ ID NO: 15, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 16, залишкам з 150 по 202 SEQ ID NO: 17, залишкам з 132 по 184 SEQ ID NO: 18, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 19, залишкам з 147 по 199 SEQ ID NO: 20, залишкам з 190 по 242 SEQ ID NO: 21, залишкам з 162 по 214 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1240 по 1291 SEQ ID NO: 23, залишкам з 80 по 122 SEQ ID NO: 24, залишкам з 347 по 402 SEQ ID NO: 25, залишкам з 286 по 341 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 202 по 252 SEQ ID NO: 27; де LIM-домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" й одна або більше змін послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-домені мутантного білка DA1; або (ii) одну або більше змін послідовності в LIM-подібному домені, що відповідає залишкам з 200 по 266 SEQ ID NO: 4, залишкам з 182 по 248 SEQ ID NO: 5, залишкам з 214 по 280 SEQ ID NO: 6, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 7, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 8, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 9, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 10, залишкам з 180 по 246 SEQ ID NO: 11, залишкам з 178 по 244 SEQ ID NO: 12, залишкам з 181 по 247 SEQ ID NO: 13, залишкам з 184 по 250 SEQ ID NO: 14, залишкам з 575 по 641 SEQ ID NO: 15, залишкам з 183 по 149 SEQ ID NO: 16, залишкам з 209 по 275 SEQ ID NO: 17, залишкам з 191 по 257 SEQ ID NO: 18, залишкам з 183 по 249 SEQ ID NO: 19, залишкам з 206 по 272 SEQ ID NO: 20, залишкам з 249 по 315 SEQ ID NO: 21, залишкам з 221 по 287 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1298 по 1363 SEQ ID NO: 23, залишкам з 130 по 176 SEQ ID NO: 24, залишкам з 406 по 465 SEQ ID NO: 25, залишкам з 345 по 404 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 256 по 319 SEQ ID NO: 27, де LIM-подібний домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" та зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-подібному домені мутантного білка DA1. 2. Спосіб за п. 1, який відрізняється тим, що зазначений білок DA1 експресують з гетерологічної кодуючої послідовності нуклеїнової кислоти в одній або більше клітинах рослини. 3. Спосіб одержання рослини зі збільшеним розміром насінини або масою насіння на одиницю площі, який включає: введення в клітину рослини гетерологічної нуклеїнової кислоти, що кодує мутантний білок DA1, причому мутантний білок DA1 містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 80 % ідентичності з послідовністю DA1, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NOS: 4-27; зазначений мутантний білок DA1 має: (i) одну або більше змін послідовності в LIM-домені, що відповідає залишкам з 141 по 193 SEQ ID NO: 4, залишкам з 123 по 175 SEQ ID NO: 5, залишкам з 155 по 207 SEQ ID NO: 6, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 7, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 8, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 9, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 10, залишкам з 121 по 173 SEQ ID NO: 11, залишкам з 119 по 171 SEQ ID NO: 12, залишкам з 122 по 174 SEQ ID NO: 13, залишкам з 125 по 177 SEQ ID NO: 14, залишкам з 516 по 568 SEQ ID NO: 15, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 16, залишкам з 150 по 202 SEQ ID NO: 17, залишкам з 132 по 184 SEQ ID NO: 18, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 19, залишкам з 147 по 199 SEQ ID NO: 20, залишкам з 190 по 242 SEQ ID NO: 21, залишкам з 162 по 214 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1240 по 1291 SEQ ID NO: 23, залишкам з 80 по 122 SEQ ID NO: 24, залишкам з 347 по 402 SEQ ID NO: 25, залишкам з 286 по 341 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 202 по 252 SEQ ID NO: 27; де LIM-домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця", й одна або більше змін послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-домені мутантного білка DA1; або (ii) одну або більше змін послідовності в LIM-подібному домені, що відповідає залишкам з 200 по 266 SEQ ID NO: 4, залишкам з 182 по 248 SEQ ID NO: 5, залишкам з 214 по 280 SEQ ID NO: 6, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 7, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 8, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 9, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 10, залишкам з 180 по 246 SEQ ID NO: 11, залишкам з 178 по 244 SEQ ID NO: 12, залишкам з 181 по 247 SEQ ID NO: 13, залишкам з 184 по 250 SEQ ID NO: 14, залишкам з 575 по 641 SEQ ID NO: 15, залишкам з 183 по 149 SEQ ID NO: 16, залишкам з 209 по 275 SEQ ID NO: 17, залишкам з 191 по 257 SEQ ID NO: 18, залишкам з 183 по 249 SEQ ID NO: 19, залишкам з 206 по 272 SEQ ID NO: 20, залишкам з 249 по 315 SEQ ID NO: 21, залишкам з 221 по 287 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1298 по 1363 SEQ ID NO: 23, залишкам з 130 по 176 SEQ ID NO: 24, залишкам з 406 по 465 SEQ ID NO: 25, залишкам з 345 по 404 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 256 по 319 SEQ ID NO: 27, де LIM-подібний домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" та зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-подібному домені мутантного білка DA1, або введення мутації у нуклеотидну послідовність клітини рослини, що кодує білок DA1, який має щонайменше 80 % ідентичності з послідовністю DA1, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NOS: 4-27, таким чином, що нуклеотидна послідовність кодує мутантний білок DA1, що містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 80 % ідентичності з послідовністю DA1, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NO: 4-27; зазначений мутантний білок DA1 має: (i) одну або більше змін послідовності в LIM-домені, що відповідає залишкам з 141 по 193 SEQ ID NO: 4, залишкам з 123 по 175 SEQ ID NO: 5, залишкам з 155 по 207 SEQ ID NO: 6, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 7, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 8, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 9, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 10, залишкам з 121 по 173 SEQ ID NO: 11, залишкам з 119 по 171 SEQ ID NO: 12, залишкам з 122 по 174 SEQ ID NO: 13, залишкам з 125 по 177 SEQ ID NO: 14, залишкам з 516 по 568 SEQ ID NO: 15, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 16, залишкам з 150 по 202 SEQ ID NO: 17, залишкам з 132 по 184 SEQ ID NO: 18, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 19, залишкам з 147 по 199 SEQ ID NO: 20, залишкам з 190 по 242 SEQ ID NO: 21, залишкам з 162 по 214 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1240 по 1291 SEQ ID NO: 23, залишкам з 80 по 122 SEQ ID NO: 24, залишкам з 347 по 402 SEQ ID NO: 25, залишкам з 286 по 341 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 202 по 252 SEQ ID NO: 27; де LIM-домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" й одна або більше змін послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-домені мутантного білка DA1; або (ii) одну або більше змін послідовності в LIM-подібному домені, що відповідає залишкам з 200 по 266 SEQ ID NO: 4, залишкам з 182 по 248 SEQ ID NO: 5, залишкам з 214 по 280 SEQ ID NO: 6, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 7, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 8, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 9, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 10, залишкам з 180 по 246 SEQ ID NO: 11, залишкам з 178 по 244 SEQ ID NO: 12, залишкам з 181 по 247 SEQ ID NO: 13, залишкам з 184 по 250 SEQ ID NO: 14, залишкам з 575 по 641 SEQ ID NO: 15, залишкам з 183 по 149 SEQ ID NO: 16, залишкам з 209 по 275 SEQ ID NO: 17, залишкам з 191 по 257 SEQ ID NO: 18, залишкам з 183 по 249 SEQ ID NO: 19, залишкам з 206 по 272 SEQ ID NO: 20, залишкам з 249 по 315 SEQ ID NO: 21, залишкам з 221 по 287 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1298 по 1363 SEQ ID NO: 23, залишкам з 130 по 176 SEQ ID NO: 24, залишкам з 406 по 465 SEQ ID NO: 25, залишкам з 345 по 404 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 256 по 319 SEQ ID NO: 27, де LIM-подібний домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" та зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-подібному домені мутантного білка DA1; і регенерацію рослини з клітини рослини. 4. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що зазначена рослина, яка експресує мутантний білок DA1, характеризується збільшеною тривалістю життя, розміром органів і/або розміром насінини у порівнянні з контролями. 5. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що білок DA1 із інактивованим LIM і/або LIM-подібним доменом має аберантну пептидазну активність відносно білка DA1 дикого типу. 6. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що LIM-домен білка DA1 інактивований. 7. Спосіб за п. 6, який відрізняється тим, що LIM-домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця", а зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця". 8. Спосіб за будь-яким із пп. 6-7, який відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше Zn координуючих залишків у LIM-домені. 9. Спосіб за будь-яким із пп. 6-8, який відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше не-Zn координуючих залишків у LIM-домені. 10. Спосіб за п. 9, який відрізняється тим, що не-Zn координуючі залишки у LIM-домені розташовані в межах 4 залишків Zn координуючого залишку у LIM-домені. 11. Спосіб за п. 10, який відрізняється тим, що не-Zn координуючі залишки у LIM-домені розташовані на відстані 4 або більше залишків від Zn координуючого залишку у LIM-домені. 12. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що LIM-подібний домен білка DA1 інактивований. 13. Спосіб за п. 12, який відрізняється тим, що LIM-подібний домен дикого типу має послідовність SEQ ID NO: 29, 30 або 31. 14. Спосіб за будь-яким із пп. 12-13, який відрізняється тим, що LIM-подібний домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця", а зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця". 15. Спосіб за будь-яким із пп. 12-14, який відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше Zn координуючих залишків у LIM-подібному домені. 16. Спосіб за будь-яким із пп. 12-13, який відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше не-Zn координуючих залишків у LIM-подібному домені. 17. Спосіб за п. 16, який відрізняється тим, що не-Zn координуючі залишки у LIM-подібному домені розташовані в межах 4 залишків Zn координуючого залишку в LIM-подібному домені. 18. Спосіб за п. 17, який відрізняється тим, що інші залишки у LIM-подібному домені розташовані на відстані 4 або більше залишків від консервативних залишків цистеїну в LIM-подібному домені. 19. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що білок DA1 містить C-кінцеву область, що має щонайменше 80 % ідентичності послідовності із залишками 229-532 із SEQ ID NO: 8. 20. Спосіб за п. 19, який відрізняється тим, що C-кінцева область містить металопептидазний мотив HEMMH (SEQ ID NO: 32). 21. Спосіб за п. 19 або 20, який відрізняється тим, що C-кінцева область містить амінокислотну послідовність EK(X)8R(X)4SEEQ (SEQ ID NO: 33) або EK(X)8R(X)4SEQ (SEQ ID NO: 34). 22. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що білок DA1 містить UIM1-домен із SEQ ID NO: 35 й UIM2-домен із SEQ ID NO: 36. 23. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що білок DA1 містить одну або більше змін послідовності відносно послідовності DA1 дикого типу, які порушують або інактивують активність або функцію LIM-домену. 24. Спосіб за п. 22, який відрізняється тим, що послідовність DA1 дикого типу містить амінокислотну послідовність будь-якої з SEQ ID NOS: 4-27 або є її варіантом. 25. Спосіб за п. 24, який відрізняється тим, що послідовність DA1 дикого типу містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 80 % ідентичності послідовності до будь-якої з SEQ ID NOS: 4-27. 26. Спосіб за будь-яким із попередніх пунктів, який відрізняється тим, що нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1, функціонально пов'язана з гетерологічним промотором. 27. Спосіб за п. 26, який відрізняється тим, що промотор є тканинноспецифічним промотором або індукованим промотором. 28. Спосіб за будь-яким із пп. 26-27, який відрізняється тим, що нуклеїнова кислота, що кодує білкову кислоту DA, міститься в одному або більше векторах. 29. Спосіб за будь-яким із пп. 1-4, який відрізняється тим, що рослина або рослинна клітина має дефіцит в EOD1 експресії або активності. 30. Нуклеїнова кислота, що кодує мутантний білок DA1, причому мутантний білок DA1 містить амінокислотну послідовність, яка має щонайменше 80 % ідентичності з послідовністю DA1, вибраною з групи, що складається з SEQ ID NOS: 4-27; зазначений мутантний білок DA1 має: (i) одну або більше змін послідовності в LIM-домені, що відповідає залишкам з 141 по 193 SEQ ID NO: 4, залишкам з 123 по 175 SEQ ID NO: 5, залишкам з 155 по 207 SEQ ID NO: 6, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 7, залишкам з 172 по 224 SEQ ID NO: 8, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 9, залишкам з 117 по 169 SEQ ID NO: 10, залишкам з 121 по 173 SEQ ID NO: 11, залишкам з 119 по 171 SEQ ID NO: 12, залишкам з 122 по 174 SEQ ID NO: 13, залишкам з 125 по 177 SEQ ID NO: 14, залишкам з 516 по 568 SEQ ID NO: 15, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 16, залишкам з 150 по 202 SEQ ID NO: 17, залишкам з 132 по 184 SEQ ID NO: 18, залишкам з 124 по 176 SEQ ID NO: 19, залишкам з 147 по 199 SEQ ID NO: 20, залишкам з 190 по 242 SEQ ID NO: 21, залишкам з 162 по 214 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1240 по 1291 SEQ ID NO: 23, залишкам з 80 по 122 SEQ ID NO: 24, залишкам з 347 по 402 SEQ ID NO: 25, залишкам з 286 по 341 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 202 по 252 SEQ ID NO: 27; де LIM-домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" й одна або більше змін послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-домені мутантного білка DA1; або (ii) одну або більше змін послідовності в LIM-подібному домені, що відповідає залишкам з 200 по 266 SEQ ID NO: 4, залишкам з 182 по 248 SEQ ID NO: 5, залишкам з 214 по 280 SEQ ID NO: 6, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 7, залишкам з 231 по 297 SEQ ID NO: 8, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 9, залишкам з 176 по 242 SEQ ID NO: 10, залишкам з 180 по 246 SEQ ID NO: 11, залишкам з 178 по 244 SEQ ID NO: 12, залишкам з 181 по 247 SEQ ID NO: 13, залишкам з 184 по 250 SEQ ID NO: 14, залишкам з 575 по 641 SEQ ID NO: 15, залишкам з 183 по 149 SEQ ID NO: 16, залишкам з 209 по 275 SEQ ID NO: 17, залишкам з 191 по 257 SEQ ID NO: 18, залишкам з 183 по 249 SEQ ID NO: 19, залишкам з 206 по 272 SEQ ID NO: 20, залишкам з 249 по 315 SEQ ID NO: 21, залишкам з 221 по 287 SEQ ID NO: 22, залишкам з 1298 по 1363 SEQ ID NO: 23, залишкам з 130 по 176 SEQ ID NO: 24, залишкам з 406 по 465 SEQ ID NO: 25, залишкам з 345 по 404 SEQ ID NO: 26 або залишкам з 256 по 319 SEQ ID NO: 27, де LIM-подібний домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця" та зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця" в LIM-подібному домені мутантного білка DA1. 31. Нуклеїнова кислота за п. 30, яка функціонально пов'язана з гетерологічною регуляторною послідовністю. 32. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-31, яка відрізняється тим, що білок DA1 із інактивованим LIM і/або LIM-подібним доменом має аберантну пептидазну активність відносно білка DA1 дикого типу. 33. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-32, яка відрізняється тим, що LIM-домен білка DA1 інактивований. 34. Нуклеїнова кислота за п. 33, яка відрізняється тим, що LIM-домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця", а зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця". 35. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 33-34, яка відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше Zn координуючих залишків у LIM-домені. 36. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 33-35, яка відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше не-Zn координуючих залишків у LIM-домені. 37. Нуклеїнова кислота за п. 36, яка відрізняється тим, що не-Zn координуючі залишки у LIM-домені розташовані в межах 4 залишків від Zn координуючого залишку в LIM-домені. 38. Нуклеїнова кислота за п. 36, яка відрізняється тим, що не-Zn координуючі залишки у LIM-домені розташовані в межах 4 або більше залишків від Zn координуючого залишку в LIM-домені. 39. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-38, яка відрізняється тим, що LIM-подібний домен білка DA1 інактивований. 40. Нуклеїнова кислота за п. 39, яка відрізняється тим, що LIM-подібний домен дикого типу має послідовність SEQ ID NO: 29, 30 або 31. 41. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 39-40, яка відрізняється тим, що LIM-подібний домен дикого типу містить два мотиви "цинкового пальця", а зміни послідовності скасовують один або обидва мотиви "цинкового пальця". 42. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 39-41, яка відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше Zn координуючих залишків у LIM-подібному домені. 43. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 39-40, яка відрізняється тим, що зміни послідовності включають мутацію одного або більше не-Zn координуючих залишків у LIM-подібному домені. 44. Нуклеїнова кислота за п. 43, яка відрізняється тим, що не-Zn координуючі залишки у LIM-подібному домені розташовані в межах 4 залишків Zn координуючого залишку в LIM-домені. 45. Нуклеїнова кислота за п. 43, яка відрізняється тим, що інші залишки у LIM-подібному домені розташовані в межах 4 або більше залишків від консервативних залишків цистеїну в LIM-подібному домені. 46. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-45, яка відрізняється тим, що білок DA1 містить C-кінцеву область, що має щонайменше 80 % ідентичності послідовності із залишками 229-532 із SEQ ID NO: 8. 47. Нуклеїнова кислота за п. 46, яка відрізняється тим, що C-кінцева область містить металопептидазний мотив HEMMH (SEQ ID NO: 32). 48. Нуклеїнова кислота за п. 46 або 47, яка відрізняється тим, що C-кінцева область містить амінокислотну послідовність EK(X)8R(X)4SEEQ (SEQ ID NO: 33) або EK(X)8R(X)4SEQ (SEQ ID NO: 34). 49. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-48, яка відрізняється тим, що білок DA1 містить UIM1-домен із SEQ ID NO: 35 й UIM2-домен із SEQ ID NO: 36. 50. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-49, яка відрізняється тим, що білок DA1 містить одну або більше змін послідовності відносно послідовності DA1 дикого типу, які порушують або інактивують активність або функцію LIM-домену. 51. Нуклеїнова кислота за п. 49, яка відрізняється тим, що послідовність DA1 дикого типу містить амінокислотну послідовність будь-якої з SEQ ID NOS: 4-27 або є її варіантом. 52. Нуклеїнова кислота за п. 51, яка відрізняється тим, що послідовність DA1 дикого типу містить амінокислотну послідовність, що має щонайменше 80 % ідентичності послідовності до будь-якої з SEQ ID NOS: 4-27. 53. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 30-52, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1, функціонально пов'язана з гетерологічним промотором. 54. Нуклеїнова кислота за п. 53, яка відрізняється тим, що промотор є тканинноспецифічним промотором або індукованим промотором. 55. Нуклеїнова кислота за будь-яким із пп. 53-54, яка відрізняється тим, що нуклеїнова кислота, що кодує білок DA, міститься в одному або більше векторах. 56. Вектор, який містить нуклеїнову кислоту за будь-яким із пп. 30-55. 57. Клітина рослини, яка містить гетерологічну нуклеїнову кислоту за будь-яким із пп. 30-55 або вектор за п. 56. 58. Рослина, яка містить клітину рослини за п. 57. 59. Рослина за п. 58, яку отримують способом за будь-яким із пп. 1-29. 60. Пропагула трансгенної рослини за п. 58. 61. Застосування вектора за п. 56 у способі підвищення врожаю рослини.

ПОВНИЙ ОПИС

Опис винаходу або моделі

Показати повний текст
Даний винахід відноситься до способів зміни розмірів насіння та органів рослин, наприклад, для поліпшення врожайності рослин. Розмір насіння та органів є важливою з погляду агрономії та екології ознакою, що перебуває під генетичним контролем (Alonso-Blanco, С. PNAS USA 96, 4710-7 (1999); Song, X.J. Nat Genet 39, 623-30 (2007); Weiss, J. Int J Dev Biol 49, 513-25 (2005); Dinneny, J.R. Development 131, 1101-10 (2004); Disch, S. Curr Biol 16, 272-9 (2006); Science 289, 85-8 (2000); Horiguchi, G. Plant J 43, 68-78 (2005); Hu, Y Plant J 47, 1-9 (2006); Hu, Y.Plant Cell 15, 1951-61 (2003); Krizek, B.A. Dev Genet 25, 224-36 (1999); Mizukami, Y. PNAS USA 97, 942-7 (2000); Nath, U. Science 299, 1404-7 (2003); Ohno, C.K. Development 131,1111-22 (2004); Szecsi, J. Embo J 25, 3912-20 (2006); White, D.W. PNAS USA 103, 13238-43 (2006); Horvath, B.M. Embo J 25, 4909-20 (2006); Garcia, D. Plant Cell 17, 52-60 (2005). Кінцевий розмір насіння та органів є постійним у межах конкретного виду, тоді як міжвидова варіативність розміру насіння та органів є значно більшою. Це свідчить про те, що рослинам властиві регуляторні механізми, скоординовані та вчасно контролюючі ріст насіння та органів. Однак, незважаючи на важливість розміру насіння та органів, про молекулярні та генетичні механізми, які контролюють кінцевий розмір насіння та органів у рослин, відомо небагато. Генетичну регуляцію розміру насіння досліджували в рослин, у тому числі в помідорів, сої, маїсу та рису, із застосуванням картування локусу кількісних ознак (quantitative trait locus, QTL). В опублікованій на сьогоднішній день літературі повідомляється про виявлення двох генів (Song, X.J. Nat Genet 39, 623-30 (2007); Fan, C. Theor. Appl. Genet. 112, 1164-1171 (2006)), що відповідають двом великим QTL, відповідальним за розмір зерен рису, хоча молекулярні механізми функціонування даних генів до кінця не вивчені. В арабідопсису було картовано одинадцять локусів, що впливають на масу та/або довжину насіння у продуктах схрещування між ізолятами Ler і Cvi {Alonso-Blanco, 1999 посилання вище}, але відповідні гени не були виявлені. У недавно проведених дослідженнях було показано, що АР2 і ARF2 залучені в контроль розміру насіння. Однак, на жаль, мутанти ар2 і arf2 характеризуються меншою фертильністю, ніж дикий тип (Schruff, M.C. Development 137, 251 - 261 (2006); Onto, M.A. PNAS USA 102, 3123 - 3128 (2005); Jofuku, K.D. PNAS USA 102, 3117 - 3122 (2005)). Крім того, дослідження із застосуванням мутантних рослин дозволили виявити декілька позитивних і негативних регуляторів, що впливають на розмір органів за допомогою впливу на проліферацію або розмноження клітин {Krizek, B.A. Dev Genet 25, 224-36 (1999); Mizukami, Y.Proc Natl Acad Sci USA 97, 942-7 (2000); Nath, U. Science 299, 1404 - 7 (2003); Ohno, C.K. Development 131, 1111-22 (2004); Szecsi, J. EmboJ 25, 3912-20 (2006); White, D.W. PNAS USA 103, 13238 - 43 (2006); Horvath, B.M. Embo J 25, 4909-20 (2006); Garcia, D. Plant Cell 17, 52 - 60 (2005). Horiguchi, G. Plant J 43, 68 - 78 (2005); Hu, Y Plant J 41, 1 - 9 (2006) Dinneny, J.R. Development 131, 1101 - 10 (2004)). Відомо, що на розмір насіння впливають декілька факторів, залучених в активності, пов'язані з убіквітином. Фактор, який обмежує ріст, DA1, являє собою рецептор убіквітину та містить два убіквітин - взаємодіючих мотиви (ubiquitin interaction motif, UIM), які зв'язують убіквітин in vitro, і в мутанта da1-1 утворюються більші насінини в результаті впливу на материнські покриви сім’я бруньки (Li et al., 2008). Мутації в енхансері da1-1 (EOD1), який кодує убіквітин-лігазу Е3 BIG BROTHER (BB) (Disch et al., 2006; Li et al., 2008), синергетично підсилюють фенотип розміру насіння da1-1. Це свідчить, що DA1 діє синергетично з EOD1/BB при здійсненні контролю розміру насіння. Виявлення додаткових факторів, що контролюють підсумковий розмір насіння й органів, не тільки поліпшить розуміння механізмів контролю розміру в рослин, але може також знайти значне практичне застосування, наприклад, для поліпшення врожайності культур і біомаси рослин для одержання біопалива. Короткий опис винаходу Автори даного винаходу несподівано виявили, що порушення LIM - домена й/або LIM - подібного домена у білках DA1 рослин не перешкоджає гомодимеризації або активності DA, а замість цього надає домінантно-негативний фенотип. В аспекті даного винаходу запропонований спосіб збільшення врожайності рослини або посилення пов'язаної з врожайністю ознаки в рослини, який включає здійснення експресії білка DA1, що містить інактивований LIM -домен або LIM - подібний домен, у клітинах зазначеної рослини. Білок DA1 може містити одну або декілька мутацій у порівнянні з послідовністю дикого типу, які порушують або інактивують LIM - домен або LIM - подібний домен білка DA1. Експресія білка DA1 з порушеним або інактивованим LIM - доменом або LlМ - подібним доменом підсилює одну або декілька пов'язаних із врожайністю ознак і збільшує врожайність рослини. Білок DA1, який містить інактивований LIM - домен або LIM - подібний домен, можна експресувати із кодуючої послідовності, гетерологічної нуклеїнової кислоти в одній або декількох клітинах рослини або можна експресувати із кодуючої послідовності ендогенної нуклеїнової кислоти в одній або декількох клітинах рослини. В іншому аспекті даного винаходу запропонований спосіб одержання рослини із збільшеною врожайністю та/або з однією або декількома посиленими ознаками, пов'язаними з врожайністю, який включає: введення в клітину рослини гетерологічної нуклеїнової кислоти, що кодує білок DA1, яка містить інактивований LIM - домен або LIM - подібний домен, або введення в нуклеотидну послідовність клітини рослини, що кодує білок DA1, мутації, внаслідок якої LIM - домен або LIM - подібний домен білка DA1 стає інактивованим, і регенерацію рослини із клітини рослини. В іншому аспекті даного винаходу запропонована клітина рослини, яка містить гетерологічну нуклеїнову кислоту, що кодує білок DA1, яка містить інактивований LIM - домен або LIM - подібний домен. В іншому аспекті даного винаходу запропонована рослина, яка містить одну або декілька клітин рослини, які містять гетерологічну нуклеїнову кислоту, що кодує білок DA1, яка містить інактивований LIM - домен або LIM - подібний домен. Рослина може демонструвати збільшену врожайність або посилення пов'язаної з врожайністю ознаки у порівнянні з контролями. На фігурі 1 представлені характеристики восьми залишків, які сполучають цинк (1-8), і відстані між ними в LIM - домені, встановлені в результаті аналізу 135 послідовностей LIM людини. Рідко спостережувані ділянки (<10 %) консервативної послідовності та топографія LIM-домена. На фігурі 2 представлена топологія координації Zn в LIM-домені. Фіолетові кола позначають залишки, що сполучають Zn. Напівконсервативні аліфатичні/об'ємні залишки показані зеленим кольором, неконсервативні залишки, розташовані на постійній відстані, - червоним. Пунктирні жовті кола означають змінне число залишків (X), можливе у просторі. На фігурі 3 представлені результати імунопреципітації in vitro, які демонструють сполучення da11im8 з DA1 дикого типу. Експресовані в Е. colі білки-приманки, мічені GST (глутатіон-S-трансферазою), інкубували з експресованими в Е. coli білками-здобиччю, міченими міткою FLAG, з наступним очищенням на гранулах глутатіон-сефарози й аналізом методом імуноблотингу для виявлення GST і FLAG. FLAG-DA1 і FLAG-da11im8 були виділені разом з GST-DA1 і GST-da11im8 (доріжки 5, 6, 8, 9), але не з негативним контролем GST-GUS (доріжки 2, 3); дані результати свідчать, що введення мутації в LIM - домен DA1 недостатньо для усунення фізичної взаємодії між білками DA1. На фігурі 4 представлений ефект мутації 1іm8 на розмір насіння у раси Соl. Докладний опис варіантів реалізації винаходу Даний винахід відноситься до експресії білків DA1, у яких LIM- або LIM - подібний домен є порушеним або інактивованим (у даній заявці в сукупності називаються білками DA1 з порушеним LIM), у рослин. Дана експресія може бути придатною для зміни ознак рослини, які впливають на врожайність, таких як розмір насіння й органів. DA1 являє собою рецептор убіквітину рослин, що докладно описаний у публікаціях Li et al (2008), Wang, et al (2012) і WO2009/047525. Білки DA1 характеризуються наявністю LIM - домена, LIM - подібного домена, консервативного С-кінцевого домена й одного або декількох UIM-доменів. LIM-домен містить два мотиви "цинкового пальця" і може містити амінокислотну послідовність (SEQ ID NO: 1): де X являє собою будь-яку амінокислоту, і залишки, що координують Zn, підкреслені. Залишки в LIM - домені, які координують Zn, можуть являти собою С, Н, D або Е, переважно С. Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу LlМ-домен може містити мотиви СХХС, НХХСХХСХХС і НххС, де X являє собою будь-яку амінокислоту. Наприклад, LIM - домен може містити амінокислотну послідовність (SEQ ID NO: 2): де X являє собою будь-яку амінокислоту, і залишки, що координують Zn, підкреслені. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу LIM-домен може містити амінокислотну послідовність LlМ-домена AtDA1: CAGCNMEIGHGRFLNCLNSLWHPECFRCYGCSQPISEYEFSTSGNYPFHKACY (SEQ ID NO: 3; залишки, що координують Zn, підкреслені) Інші LlМ - домени включають LlМ - домен відповідно до амінокислотної послідовності DA1, представленої в таблиці 1 (пунктирний квадрат), наприклад, залишки з 141 по 193 SEQ ID NO: 4 (Si_GI-514815267.pro), залишки з 123 по 175 SEQ ID NO: 5 (Bd_GI-З57157184.рго), залишки з 155 по 207 SEQ ID NO: 6 (Br_DA1b.pro), залишки з 172 по 224 SEQ ID NO: 7 (Br_DA1a.pro), залишки з 172 по 224 SEQ ID NO: 8 (At_GI-15221983.pro), залишки з 117 по 169 SEQ ID NO: 9 (Tc_GI-508722773.pro), залишки з 117 по 169 SEQ ID NO: 10 (Gm_GI-356564241.pro), залишки з 121 по 173 SEQ ID NO: 11 (Gm_GI-356552145.pro), залишки з 119 по 171 SEQ ID NO: 12 (Vv_GI-З02142429.рго), залишки з 122 по 174 SEQ ID NO: 13 (Vv_GI-359492104.pro), залишки з 125 по 177 SEQ ID NO: 14 (S1_GI-460385048.pro), залишки з 516 пo 568 SEQ ID NO: 15 (Os_GI-218197709.pro), залишки з 124 по 176 SEQ ID NO: 16 (Os_GI-115466772.pro), залишки з 150 пo 202 SEQ ID NO: 17 (Bd_GI-357160893.pro), залишки з 132 пo 184 SEQ ID NO: 18 (Bd_GI-357164660.pro), залишки з 124 по 176 SEQ ID NO: 19 (Sb_GI-242092232.pro), залишки з 147 пo 199 SEQ ID NO: 20 (Zm_GI-212275448.pro), залишки з 190 no 242 SEQ ID NO: 21 (At_GI-240256211.pro), залишки з 162 по 214 SEQ ID NO: 22 (At_GI-145360806.pro), залишки з 1240 по 1291 SEQ ID NO: 23 (At_GI-22326876.pro), залишки з 80 по 122 SEQ ID NO: 24 (At_GI-30698242.pro), залишки з 347 по 402 SEQ ID NO: 25 (At_GI-30698240.pro), залишки з 286 по 341 SEQ ID NO: 26 (At_GI-15240018.pro) або залишки з 202 по 252 SEQ ID NO: 27 (At_GI-334188680.pro). Послідовності LIM-домена можна виявити із застосуванням стандартних методик аналізу послідовності (наприклад, Simple Modular Architecture Research Tool (SMART); EMBL Heidelberg, DE). LIM - подібний домен містить два мотиви "цинкового пальця" і може містити мотиви СХХС, НХХХХХХХСХХН і СххС, де X являє собою будь-яку амінокислоту. Наприклад, LIM - подібний домен може містити амінокислотну послідовність (SEQ ID NO: 28): де X являє собою будь-яку амінокислоту, залишки, що координують Zn, підкреслені суцільною рискою, і передбачувані залишки, що координують Zn, підкреслені пунктиром. Переважно, LIM - подібний домен може містити амінокислотну послідовність (SEQ ID NO: 29): де X являє собою будь-яку амінокислоту, залишки, що координують Zn, підкреслені суцільною рискою, і передбачувані залишки, що координують Zn, підкреслені пунктиром. Більше переважно, LIM - подібний домен може містити амінокислотну послідовність (SEQ ID NO: 30): де X являє собою будь-яку амінокислоту, залишки, що координують Zn, підкреслені суцільною рискою, і передбачувані залишки, що координують Zn, підкреслені пунктиром. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу LIM - подібний домен може містити амінокислотну послідовність LIM - подібного домена AtDA1: Інші LIM - подібні домени включають LIM - домен відповідно до амінокислотної послідовності DA1, представленої в таблиці 1 (суцільний квадрат), наприклад, залишки з 200 по 266 SEQ ID NO: 4 (Si_GI-514815267.pro), залишки з 182 по 248 SEQ ID NO: 5 (Bd_GI-357157184.pro), залишки з 214 по 280 SEQ ID NO: 6 (Br_DA1b.pro), залишки з 231 по 297 SEQ ID NO: 7 (Br_DA1a.pro), залишки з 231 по 297 SEQ ID NO: 8 (At_GI-15221983.рго), залишки з 176 по 242 SEQ ID NO: 9 (Tc_GI-508722773.pro), залишки з 176 по 242 SEO ID NO: 10 (Gm_GI-356564241.pro), залишки з 180 по 246 SEQ ID NO: 11 (Gm_GI-356552145.pro), залишки з 178 по 244 SEQ ID NO: 12 (Vv_GI-З02142429.рго), залишки з 181 по 247 SEQ ID NO: 13 (Vv_GI-359492104.pro), залишки з 184 по 250 SEQ ID NO: 14 (S1_GI-460385048.pro), залишки з 575 по 641 SEQ ID NO: 15 (Os_GI-218197709.pro), залишки з 183 по 149 SEQ ID NO: 16 (Os_GI-115466772.pro), залишки з 209 пo 275 SEQ ID NO: 17 (Bd_GI-357160893.pro), залишки з 191 пo 257 SEQ ID NO: 18 (Bd_GI-357164660.pro), залишки з 183 пo 249 SEQ ID NO: 19 (Sb_GI-242092232.pro), залишки з 206 по 272 SEQ ID NO: 20 (Zm_GI-212275448.pro), залишки з 249 пo 315 SEQ ID NO: 21 (At_GI-240256211.pro), залишки з 221 по 287 SEQ ID NO: 22 (At_GI-145360806.pro), залишки з 1298 по 1363 SEQ ID NO: 23 (At_GI-22326876.pro), залишки з 130 по 176 SEQ ID NO: 24 (At_GI-30698242.pro), залишки з 406 по 465 SEQ ID NO: 25 (At_GI-30698240.pro), залишки з 345 по 404 SEQ ID NO: 26 (At_GI-15240018.pro) або залишки з 256 по 319 SEQ ID NO: 27 (At_GI-334188680.pro). Послідовності LIM - подібного домена в інших білках DA1 можна виявити із застосуванням стандартних методик аналізу послідовності, використовуючи інформацію, наведену вище (наприклад, Simple Modular Architecture Research Tool (SMART); EMBL Heidelberg, DE). Крім LIM - домена та LIM - подібного домена, білок DA1 може додатково містити карбокси - кінцеву область, що містить амінокислотну послідовність, щонайменше на 20 %, щонайменше на 30 %, щонайменше на 40 %, щонайменше на 50 %, щонайменше на 60 %, щонайменше на 70 %, щонайменше на 80 %, щонайменше на 90 %, щонайменше на 95 % або щонайменше на 98 % амінокислот ідентичну послідовності залишків з 198 по 504 SEQ ID NO: 4, залишків з 180 по 487 SEQ ID NO: 5, залишків з 212 по 514 SEQ lD NO: 6, залишків з 229 по 532 SEQ ID NO: 7, залишків з 229 по 532 SEQ ID NO: 8, залишків з 174 по 478 SEQ ID NO: 9, залишків з 174 по 474 SEQ ID NO: 10, залишків з 178 по 478 SEQ ID NO: 11, залишків з 176 по 462 SEQ ID NO: 12, залишків з 179 по 482 SEQ ID NO: 13, залишків з 182 по 486 SEQ ID NO: 14, залишків з 573 по 878 SEQ ID NO: 15, залишків з 181 по 486 SEQ ID NO: 16, залишків з 207 по 512 SEQ ID NO: 17, залишків з 189 по 491 SEQ ID NO: 18, залишків з 181 по 486 SEQ ID NO: 19, залишків з 204 по 508 SEQ ID NO: 20, залишків з 247 по 553 SEQ ID NO: 21, залишків з 219 по 528 SEQ ID NO: 22, залишків з 1296 по 1613 SEQ ID NO: 23, залишків з 128 по 450 SEQ ID NO: 24, залишків з 404 по 702 SEQ ID NO: 25, залишків з 343 по 644 SEQ ID NO: 26 або залишків з 256 по 587 SEQ ID NO: 27. Карбокси - кінцева область білка DA1 може містити мотив активного сайту металопептидази НЕММН (SEQ ID NO: 32). Карбокси - кінцева область може додатково містити мотив EK(X)8R(X)4SEEQ (SEQ ID NO: 33) або EK(X)8R(X)4SEQ (SEQ ID NO: 34), розташований між LIM-доменом і мотивом НЕММН. Крім LIM-домена та консервативної карбокси - кінцевої області, білок DA1 може містити домен UIM1 і домен UIM2. Домени UIM1 і UIM2 можуть бути розташовані між N - кінцем і LIM-доменом білка DA1. Домен UIM1 може складатись з послідовності SEQ ID NO: 35, а домен UIM2 може складатись з послідовності SEQ ID NO: 36. p---pLpbA1 pb.Sbp-.pp p (SEQ ID NO: 35) p---pLpbA1 pb.Sbp-spp p (SEQ ID NO: 36), де: p являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, С, D, Е, Н, К, N, Q, R, S або Т; b являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад, Е, F, Н, І, К, L, М, Q, R, W або Y; s являє собою залишок невеликої амінокислоти, наприклад, А, С, D, G, N, P, S, Т або V; 1 являє собою залишок аліфатичної амінокислоти, наприклад, І, L або V; відсутній або являє собою будь-яку амінокислоту, і являє собою будь-яку амінокислоту. Додаткові приклади послідовностей доменів UIM1 і UIM2 можна виявити із застосуванням стандартних методик аналізу послідовності, описаних у даній заявці (наприклад, Simple Modular Architecture Research Tool (SMART); EMBL Heidelberg, DE). Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу білок DA1 може містити: LIM-домен згідно з SEQ ID NO: 1, LIM - подібний домен згідно з SEQ ID NO: 28, С-кінцеву область, яка характеризується ідентичністю послідовності щонайменше 20 % залишкам з 229 по 532 SEQ ID NO: 8, або еквівалентну область будь-якої з SEQ NO 4 - 7 або 9 - 27, викладених вище, і які містять мотив EK(X)8R(X)4SEEQ або EK(X)8R(X)4SEQ і мотив НЕММН, домен UIM SEQ ID NO: 35 і домен UIM SEQ ID NO: 36. Білок DA1 може містити амінокислотну послідовність білка DA1 рослини, представлену в таблиці 1 (SEQ ID NO: 4-27), або може являти собою алель або варіант однієї з даних послідовностей, що має активність DA1. Наприклад, білок DA1 може містити амінокислотну послідовність AtDA1, AtDAR1, AtDAR2, AtDAR3, AtDAR4, AtDAR5, AtDAR6, AtDAR7, BrDA1a, BrDA1b, BrDAR1, BrDAR2, BrDAR3-7, BrDAL1, BrDAL2, BrDAL3, OsDA1, OsDAR2, OsDAL3, OsDAL5, PpDAL1, PpDAL2, PpDAL3, PpDAL4, PpDAL5, PpDAL6, PpDAL7, PpDAL8, SmDAL1, SmDAL2 або ZmDA1 (ACR35367.1 GI:238008664), переважно AtDA1, AtDAR1 BrDA1a, BrDA1b, OsDA1 або ZmDA1, або алель або варіант однієї з даних послідовностей. Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу білок DA1 може містити амінокислотну послідовність AtDA1 (SEQ ID NO: 8; AT1G19270; NP_173361.1 GI: 15221983) або може являти собою алель або варіант даної послідовності, що має активність DA1. Інші послідовності білка DA1, яким властиві характерні риси, викладені вище, і послідовності нуклеїнової кислоти, що кодують DA1, можна виявити із застосуванням стандартних інструментів для аналізу послідовності у будь-яких видах рослин, що представляють інтерес. Білок DA1 у видів рослин, що представляють інтерес, може містити амінокислотну послідовність, що являє собою варіант еталонної амінокислотної послідовності білка DA1, викладеної в даній заявці. Білок DA1, що являє собою гомолог або варіант еталонної послідовності DA1 рослини, такої як будь-яка з SEQ ID NO: 4-27, може містити амінокислотну послідовність, яка характеризується ідентичністю послідовності щонайменше 20 %, щонайменше 30 %, щонайменше 40 %, щонайменше 50 %, щонайменше 60 %, щонайменше 70 %, щонайменше 80 %, щонайменше 90 %, щонайменше 95 % або щонайменше 98 % еталонної послідовності. Конкретні варіанти амінокислотної послідовності, які виникають у видів рослин, можуть відрізнятися від еталонної послідовності, викладеної в даній заявці, у результаті вставки, додавання, заміни або делеції 1 амінокислоти, 2, 3,4, 5-10,10-20, 20 - 30, 30-50 або більше 50 амінокислот. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу поліпептид DA1, що являє собою варіант послідовності AtDA1 відповідно до будь-якої з SEQ NO: 4-27, може містити LIM-домен, що містить послідовність SEQ ID NO: 3, і LIM - подібний домен, що містить послідовність SEQ ID NO: 31. Нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1, може містити нуклеотидну послідовність, викладену в записі бази даних, яку вибирають з групи, що включає NM_101785.3 GL42562170 (AtDA1); NM_001057237.1 GI:115454202 (OsDA1); BT085014.1 GI: 238008663 (ZmDA1), або може являти собою алель або варіант однієї з даних послідовностей, які кодують активний білок DA1. Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1, може містити нуклеотидну послідовність AtDA1 (NM_101785.3 GI: 42562170), ZmDA1 (BT085014.1 GI: 238008663), OsDA1 (NM_001057237.1 GI:115454202) або може являти собою алель або варіант будь-якої з даних послідовностей, що кодують білок з активністю DA1. Нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1 у видів рослин, що представляють інтерес, може містити нуклеотидну послідовність, що являє собою варіант еталонної нуклеотидної послідовності DA1, викладеної в даній заявці. Поліпептиди DA1 і кодуючи нуклеїнові кислоти можна виявити у видах рослин, зокрема, культурних рослин, таких як пшениця, ячмінь, маїс, рис та інші сільськогосподарські рослини, із застосуванням загальноприйнятих методик аналізу послідовності. Наприклад, варіант нуклеотидної послідовності може являти собою гомолог еталонної послідовності DA1, викладеної в даній заявці, і може відрізнятися від еталонної нуклеотидної послідовності DA1 одним або декількома додаваннями, вставками, делеціями або замінами одного або декількох нуклеотидів у нуклеїновій кислоті, наприклад 2, 3, 4, 5 - 10, 10 - 20, 20 - 30, 30 - 50 або більше 50, що призводить до додавання, вставки, делеції або заміні однієї або декількох амінокислот у кодуючому білку. Зрозуміло, також включені зміни в нуклеїновій кислоті, які не впливають на кодуючу амінокислотну послідовність. Нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1, може містити послідовність, яка характеризується ідентичністю послідовності щонайменше 20 % або щонайменше 30 % з послідовністю еталонної нуклеїнової кислоти, переважно щонайменше 40 %, щонайменше 50 %, щонайменше 60 %, щонайменше 65 %, щонайменше 70 %, щонайменше 80 %, щонайменше 90 %, щонайменше 95 % або щонайменше 98 %. Ідентичність послідовності описана в даній заявці. Ідентичність послідовності зазвичай визначають на підставі алгоритму GAP (Wisconsin Package, Accelerys, San Diego, USA). В GAP використовується алгоритм Нідлмана-Вунша для вирівнювання двох повних послідовностей, що збільшує до максимуму кількість збігів і зменшує до мінімуму кількість пропусків. Як правило, використовують параметри за замовчуванням із штрафом за введення пропуску ("gap creation penalty") 12 і штрафом за подовження пропуску ("gap extension penalty") 4. Застосування GAP може бути бажаним, однак можна використовувати й інші алгоритми, наприклад, BLAST (у якому використовується спосіб Altschul et al. (1990) J. Моl. Вiol. 215: 405-410), FASTA (у якому використовується спосіб Pearson and Lipman (1988) PNAS USA 85: 2444-2448) або алгоритм Сміта-Вотермана (Smith and Waterman (1981) J. Моl Biol. 147: 195-197) або програму TBLASTN, Altschul et al. (1990) посилання вище, як правило, з використанням параметрів за замовчуванням. Зокрема, можна застосовувати алгоритм psi-Blast (Nucl. Acids Res. (1997) 25 3389-3402). Порівняння послідовностей можна проводити за всією довжиною відповідної послідовності, описаної в даній заявці. Нуклеотидну послідовність DA1, яка являє собою варіант еталонної послідовності нуклеїнової кислоти DA1, викладеної в даній заявці, можна селективно гібридизувати у суворих умовах з даною еталонною послідовністю нуклеїнової кислоти або послідовністю, комплементарною зазначеній послідовності. Суворі умови включають, наприклад, у випадку гібридизації послідовностей, які є ідентичними приблизно на 80-90 %, гібридизацію протягом ночі при температурі 42 °C в 0,25 М Na2HPO4, pH 7,2, 6,5 % SDS (додецилсульфаті натрію), 10 % сульфаті декстрану та завершальне промивання при температурі 55 °C в 0,1х SSC (цитраті та хлориді натрію), 0,1 % SDS. Умови, що підходять для виявлення послідовностей, які ідентичні більше ніж приблизно на 90 %, включають гібридизацію протягом ночі при температурі 65 °C в 0,25 М Nа2НРO4, рН 7,2, 6,5 % SDS, 10 % сульфаті декстрану та завершальне промивання при температурі 60 °C в 0,1х SSC, 0,1 % SDS. Альтернативний варіант, що може бути особливо придатним у випадку препаратів нуклеїнової кислоти рослин, являє собою 5х розчин SSPE (кінцева концентрація 0,9 М NaCl, 0,05 М фосфат натрію, 0,005 М EDTA, рН 7,7), 5х розчин Денхардта, 0,5 % SDS при температурі 50 °C або 65 °C протягом ночі. Промивання можна проводити в 0,2х SSC/0,1 % SDS при температурі 65 °C або при температурі 50-60 °C в 1х SSC/0,1 % SDS, при необхідності. Білки DA1 і кодуючи нуклеїнові кислоти можна виявити у видах рослин, зокрема, культурних рослин, таких як пшениця, ячмінь, маїс, рис та інші сільськогосподарські рослини, із застосуванням загальноприйнятих методик аналізу послідовності та/або порівняння з еталонними послідовностями, викладеними в даній заявці. LlМ- домен, LIM- подібний домен або як LIM- домен, так і LIM- подібний домен білка DA1 для застосування, описаного в даній заявці, можуть бути інактивованими або порушеними ("білок DA1 з порушеним LIM"). LIM - домени та LIM- подібні домени, які докладно описані вище, можна виявити в межах будь-якого білка DA1 із застосуванням стандартних методик аналізу послідовності. Білок DA1 з інактивованим або порушеним LIM- доменом або LIM- подібним доменом може демонструвати порушену, наприклад, збільшену або активовану пептидазну активність. Наприклад, інактивація або порушення LIM- домена або LIM- подібного домена може зменшити або запобігти взаємодії домена з С-кінцевою областю білка DA1 та інгібування пептидазної активності DA1. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу білок DA1 з інактивованим або порушеним LIM-доменом або LIM-подібним доменом може демонструвати зменшену стабільність у клітині рослини після убіквітинування у порівнянні з білком DA1 дикого типу. Порушений або інактивований LIM- домен або LIM- подібний домен може бути нездатний координувати Zn або утворювати мотиви "цинкового пальця", що перешкоджає здійсненню функції домена, тобто порушений LIM- або LIM- подібний домен нездатний опосередковувати білок-білкові взаємодії. Наприклад, порушений LIM- домен або LIM- подібний домен може бути нездатний внутрішньомолекулярно взаємодіяти з С-кінцевою областю білка DA1 для інгібування пептидазної активності. Інактивований або порушений LIM- домен або LIM- подібний домен може містити зміну або мутацію послідовності, що усуває один або декілька мотивів "цинкового пальця" в LIM- або LIM- подібному домені. Амінокислотна послідовність білка DA1 може бути змінена або мутована за допомогою вставки, заміни або делеції однієї або декількох амінокислот у порівнянні з амінокислотною послідовністю дикого типу з метою інактивувати LIM- домен або LIM- подібний домен. Наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 або більше амінокислот можуть бути змінені, наприклад, делетовані або заміщені, у порівнянні з амінокислотною послідовністю дикого типу. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу можуть бути змінені від 1 до 30, від 1 до 20 або від 1 до 10 залишків. Одиничні заміни амінокислот у межах LIM- доменів і LIM- подібних доменів достатні, щоб викликати фенотип нокауту LIM. LIM- домени, наприклад, можна інактивувати за допомогою мутацій залишків, що координують Zn, або інших залишків у межах LIM- домена (Mclntosh et al (1998) Am J Human Genet 63 1651-16581; Clough et al (1999) Human mutation 14 459-465; Hamlington et al (2001) Human mutation 18 458-464; Taira et al., Nature 1994 372, 677-9; Agulnick et al., Nature 1996 384, 270-2). LIM- подібні домени можна також інактивувати у результаті мутацій залишків, що координують Zn (тобто консервативних залишків Cys), або інших залишків у межах LIM- подібного домена (Yang et al Plant Journal, (2010), 63,283-296). Підходящі інактивуючі або порушуючи мутації розташовані переважно в межах LIM- домена або LIM- подібного домена або поблизу від даних доменів. Інактивований або порушений LIM- домен або LIM- подібний домен може містити мутацію одного або декількох залишків, що координують Zn, або передбачуваних залишків, що координують Zn, наприклад, залишку цистеїну або гістидину в оточенні СххС або СХХН, і/або мутацію одного або декількох амінокислотних залишків, що не координують Zn. Інактивований або порушений LIM- домен може містити мутацію одного або декількох з першого, другого, третього, четвертого, п'ятого, шостого, сьомого та восьмого залишків, що координують Zn, в LIM- домені, представленому в SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2 вище. Наприклад, інактивований або порушений LIM- домен може містити мутацію одного або декількох залишків цистеїну в мотиві СХХС або залишків цистеїну або гістидину в мотиві НХХС, наприклад, залишків цистеїну/гістидину, представлених у положеннях 1, 4, 22, 25, 28, 31, 49 і 52 SEQ ID NO: 3 і підкреслених в SEQ ID NO 1 і 2 вище. LIM-домен зазначеного білка DA1 може містити мутацію одного або декількох підкреслених залишків LIM-домена DAI, представленого вище, переважно С141, С144, Н162, С165, С168, С171, Н189 і С192 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 4, С123, С126, Н144, С147, С150, С153, Н171 і С174 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 5, С155, С158, Н176, С179, С182, С185, Н203 і С206 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 6, С172, С175, Н193, С196, С199, С202, Н220 і С223 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 7, С172, С175, Н193, С196, С199, С202, Н220 і С223 у послідовності AtDA1 згідно з SEQ ID NO: 8, С117, С120, Н138, С141, С144, С147, Н165 і С168 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 9, С177, С180, Н198, С201, С204, С207, Н225 і С228 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 10, С121, С124, Н142, С145, С148, С151, Н169 і С172 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 11, С119, С122, Н140, С143, С146, С149, Н167 і С170 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 12, С122, С125, Н143, С146, С149, С152, Н170 і С173 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 13, С125, С128, Н146, С149, С152, С155, Н173 і С176 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 14, С516, С519, Н537, С540, С543, С546, Н564 і С567 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 15, С124, С127, Н145, С148, С151, С154, Н172 і С175 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 16, С150, С153, Н171, С174, С177, С180, Н198 і С201 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 17, С132, С135, Н153, С156, С159, С162, Н180 і СІ83 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 18, С124, С127, Н145, С148, С151, С154, Н172 і С175 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 19, С147, С150, Н168, С172, С175, С178, Н196 і С199 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 20, С190, С193, Н211, С204, С207, С210, Н228 і С231 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 21, С162, С165, Н183, С186, С189, С192, Н210 і С213 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 22, С1240, С1243, Н1261, С1264, С1267, С1270, Н1287 і С1290 у послідовності DA1 згідно з SEQ lD NO: 23, С347, С350, Н368, С371, С374, С377, Н398 і С401 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 25, С286, С289, Н307, С310, С313, С316, Н337 і С340 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 26, С201, С204, Н222, С225, С228, С231, Н248 і С251 у послідовності DA1 згідно з SEQ ID NO: 27 або еквівалентних залишків цистеїну в іншій послідовності білка DA1. Наприклад, білок DA1 з порушеним LIM може містити заміну С на Y, С на G або інші заміни в одному або декількох з даних положень. Залишки, що координують Zn, у межах LIM-домена білка DA1 можна виявити із застосуванням стандартних аналізів послідовності. Залишки цистеїну та гістидину, еквівалентні С172, С175, Н193, С196, С199, С202, Н220 і С223 в SEQ ID NO: 8, являють собою залишки послідовності, що перебувають у тому ж оточенні в іншій послідовності білка DA1, які можна виявити із застосуванням стандартних аналізів послідовності, представленої в таблиці 1. Інактивований або порушений LIM- домен може містити мутацію одного або декількох залишків, що не координують Zn, в LIM- домені, представленому в SEQ ID NO: 1 або SEQ ID NO: 2 вище. Залишок, що не координує Zn, може бути розташований у межах 4 залишків від залишку, що координує Zn, у послідовності LIM-домена або може бути розташований на 4 або більше залишків далі від залишку, що координує Zn. Інактивований або порушений LIM- подібний домен може містити мутацію одного або декількох з першого, другого, третього, четвертого, п'ятого, шостого, сьомого та восьмого залишків, що координують Zn, або передбачуваних залишків, що координують Zn, в LIM- подібному домені, представленому в будь-якій з SEQ ID NO: 28-31 вище. Наприклад, інактивований або порушений LIM- подібний домен може містити мутацію одного або декількох залишків цистеїну в мотиві СХХС або залишку цистеїну або гістидину в мотиві СХХН, наприклад, залишків цистеїну/гістидину, представлених у положеннях 1, 4, 29, 32, 40, 43, 63 або 66 SEQ ID NO: 31 і підкреслених в SEQ ID NO 28-31 вище. Два з трьох передбачуваних залишків, що координують Zn, Н252, С260, Н263 в LIM- подібному домені відповідають за координацію Zn (тобто Н252 і С260; Н252 і Н263; або С260 і Н263). LIM- подібний домен зазначеного білка DA1 може містити мутацію одного або декількох підкреслених залишків AtDA1 LIM- подібного домена, представленого вище, переважно, С232, С235, Н252, С260, Н263, С271, С274, С294 і/або С297 послідовності AtDA1 згідно з SEQ ID NO: 8, або еквівалентних залишків цистеїну в послідовності іншого білка DA1. Наприклад, білок DA1 з порушеним LIM може містити заміни С на Y, С на G або інші заміни в одному або декількох з даних положень. Залишки цистеїну, еквівалентні С232, С235, Н252, С260, Н263, С271, С274, С294 і С297 в SEQ ID NO: 8, являють собою залишки послідовності, що перебувають у тому самому оточенні в різних послідовностях білка DA1, які можна виявити із застосуванням стандартних аналізів послідовності, представленій в таблиці 1. Інактивований або порушений LIM- подібний домен може містити мутацію одного або декількох залишків в LIM- подібному домені, відмінних від консервативних залишків цистеїну або гістидину, показаних в SEQ ID NO: 28-SEQ ID NO: 31 вище. Підходящі залишки можуть бути розташовані в межах 4 залишків від консервативного залишку цистеїну або гістидину в послідовності LIM- подібного домена або можуть бути розташовані на 4 або більше залишків далі від консервативного залишку цистеїну або гістидину. Деякі переважні мутації включають перетворення залишку, що координує Zn, в LIM- або LIM- подібному домені, такого як цистеїн або гістидин, у нейтральну амінокислоту, таку як гліцин. Фахівцю будуть очевидні інші мутації, які порушують мотиви "цинкового пальця" та є підходящими для усунення LIM- або LIM- подібної функції у білка DA1. На відміну від мутацій в інших доменах у межах білка DA1, мутації LIM- домена та LIM- подібного домена дестабілізують білок DA1 у присутності його взаємодіючого партнера E0D1 у клітині рослини. Внаслідок цього підходящі мутації LIM- домена та LIM- подібного домена можна виявити за допомогою визначення стабільності мутантного білка DA1 у присутності EOD1 із застосуванням стандартних методик проведення експериментів. Зменшення стабільності у порівнянні з DA1 дикого типу свідчить, що мутація порушує LIM- або LIM- подібний домен. Білок DA1 з порушеним LIM, описаний у даній заявці, може містити консервативний залишок R, розташований в амінокислотній послідовності DA1 у положенні, що є еквівалентним положенню 358 в SEQ ID NO: 8 DA1 A. thaliana, положенню 333 в SEQ ID NO: 8 DA1 Z. mays або еквівалентним положенню в іншій амінокислотній послідовності DA1, наприклад, у послідовності DA1 відповідно до таблиці 1 (консервативний залишок R помічений стрілкою). Консервативний залишок R, який розташований в амінокислотній послідовності DA1 у положенні, що еквівалентно положенню 358 в SEQ ID NO: 8 DA1 A. thaliana або положенню 333 в DA1 Z. mays згідно з SEQ ID NO: 20, розташований у положенні в межах амінокислотної послідовності DA1, що відповідає R333 в SEQ ID NO: 20 і R358 в SEQ ID NO: 8, тобто перебуває в тому самому положенні щодо інших мотивів і доменів білка DA1. Консервативний залишок R розташований між LIM- доменом і мотивом пептидази НЕММН (SEQ ID NO: 32) С-кінцевої області й є повністю консервативним і знаходиться в тому самому оточенні у послідовностях білків DA1. Консервативний залишок R може міститись в мотиві EK(X)8R(X)4SEEQ (SEQ ID NO: 33) або EK(X)8R(X)4SEQ (SEQ ID NO: 34) у межах С-кінцевої області. Дані, наведені в даній заявці, демонструють, що LIM-домен і LIM- подібний домен не опосредковують гомодимеризацію DA1, і білок DA1 з порушеним LIM зберігає здатність до зв'язування з DA1 дикого типу. Експресія білка DA1 з порушеним LIM в одній або декількох клітинах рослини зменшує активність DA1 у клітинах і підсилює ознаки рослини, пов'язані з врожайністю, такі як розмір насіння або органів (див., наприклад, публікації Li et al (2008); WO2009/047525; Wang et al 2012), за допомогою цього збільшуючи врожайність рослин. Рослина, експресуюча білок DA1 з порушеним LIM, може характеризуватися фенотипом da1-і або фенотипом, подібним da1-1. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу білок DA1 з порушеним LIM можна експресувати із гетерологічної нуклеїнової кислоти в одній або декількох клітинах рослини. Білок DA1 з порушеним LIM можна експресувати в одній або декількох клітинах рослини із застосуванням будь-якої придатної методики, і підходящі методики добре відомі в даній області техніки. Нуклеїнову кислоту, що кодує білок DA1 з порушеним LIM, можна експресувати рекомбінантним способом у тому самому виді або різновиді рослини, з якого початково була виділена дана нуклеїнова кислота, або в іншому виді або різновиді рослини (тобто в гетерологічній рослині). Запропоновані нуклеїнові кислоти можуть бути двох - або одноланцюговими та можуть являти собою кДНК або геномну ДНК, або РНК. Нуклеїнова кислота може бути повністю або частково синтетичною, залежно від мети. Зрозуміло, фахівець розуміє, що, якщо нуклеїнова кислота містить РНК, послідовність, еталонна представленій послідовності, повинна бути сконструйована як еталонна послідовність до еквівалента РНК із заміною Т на U. Термін "гетерологічний" вказує, що ген/послідовність нуклеотидів, про які йде мова, або послідовність, яка регулює ген/послідовність, про які йде мова, були введені в зазначені клітини рослини або її попередника із застосуванням способів генної інженерії або рекомбінантних способів, тобто за допомогою втручання людини. Нуклеотидні послідовності, які є гетерологічними стосовно клітини рослини, можуть бути не існуючими у природі в клітинах даного типу, різновиду або виду (тобто екзогенними або чужорідними) або можуть являти собою послідовності, які не присутні у природі в даному внутрішньоклітинному або геномному оточенні клітин, або можуть являти собою послідовності, які у природі не регулюються в клітинах, тобто які функціонально сполучені з штучним регуляторним елементом. Нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1 з порушеним LIM, може бути функціонально сполучена з гетерологічною регуляторною послідовністю, такою як промотор, наприклад, конститутивний, індуцибельний, тканиноспецифічний промотор або промотор, специфічний до стадії розвитку, як описано вище. Нуклеїнова кислота, що кодує білок DA1 з порушеним LIM, може міститись в конструкції нуклеїнової кислоти або векторі. Конструкція або вектор є переважно підходящими для трансформації клітини рослини та/або експресії в клітині рослини. Вектор являє собою, серед іншого, будь-яку плазміду, косміду, фаг або бінарний вектор Agrobacterium у двох - або одноланцюговій лінійній або циклічній формі, що може бути самопередаваючим або мобілізуючим, або може не бути таким, і яким можна трансформувати прокаріотичного або еукаріотичного хазяїна, зокрема, рослину-хазяїн, за допомогою інтеграції в геном клітини або позахромосомного існування (наприклад, автономно реплікуюча плазміда із точкою початку реплікації). Конкретно включені "шатл-вектори", під якими мають на увазі ДНК- носій, здатний від природи або в результаті конструювання до реплікації у двох різних організмах, які можуть бути вибрані з Actinomyces і родинних видів, бактерій та еукаріотичних клітин (наприклад, клітин вищих рослин, ссавців, дріжджів або грибів). Конструкція або вектор, які містять нуклеїнову кислоту, описані вище, не обов'язково повинні містити промотор або іншу регуляторну послідовність, особливо, якщо вектор призначений для введення нуклеїнової кислоти в клітини для рекомбінації в геном. Конструкції та вектори можуть додатково містити селектовані генетичні маркери, що складаються з генів, які забезпечують селектовані фенотипи, наприклад, стійкість до антибіотиків, таких як канаміцин, гігроміцин, фосфінотрицин, хлорсульфурон, метотрексат, гентаміцин, спектиноміцин, імідазолінони, гліфосат та d-амінокислоти. Фахівці в даній області техніки можуть сконструювати вектори та розробити протоколи для експресії рекомбінантних генів, наприклад, у клітині мікроорганізмів або рослин. Можна вибрати або сконструювати підходящі вектори, що містять відповідні регуляторні послідовності, включаючи послідовності промотору, термінуючі фрагменти, послідовності поліаденілювання, послідовності енхансера, гени-маркери та інші послідовності, при необхідності. Докладні вказівки див., наприклад, у керівництвах Molecular Cloning: a Laboratory Manual: 3rd edition, Sambrook et al, 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press і Protocols in Molecular Biology, Second Edition, Ausubel et al. eds. John Wiley & Sons, 1992. Конкретні процедури та вектори, які раніше з великим успіхом використовували в рослин, описані у публікаціях Bevan, Nuc1. Acids Res. (1984) 12, 8711-8721), і Guerineau and Mullineaux, (1993) Plant transformation and expression vectors. In: Plant Molecular Biology Labfax (Croy RRD ed) (Croy RRD ed) Oxford, BIOS Scientific Publishers, pp 121-148. При введенні вибраної генетичної конструкції в клітину варто взяти до уваги певні фактори, добре відомі фахівцям у даній області техніки. Нуклеїнова кислота, яку будуть вбудовувати, повинна бути зібрана в конструкції, що містять ефективні регуляторні елементи, які будуть керувати транскрипцією. Повинен бути спосіб переносу конструкції в клітину. Після того, як конструкція виявиться під мембраною клітини, відбудеться або не відбудеться інтеграція в ендогенний хромосомний матеріал. Нарешті, переважним цільовим типом клітин є такий, клітини якого можна регенерувати в цілі рослини. Переважно застосування конструкції та способу трансформації, які підсилюють експресію нуклеїнової кислоти, що кодує білок DA1 з порушеним LIM- або LIM- подібним доменом. Інтеграція однієї копії гена в геном клітини рослини може бути корисною для мінімізації ефектів придушення експресії гена. Аналогічно, щодо цього може бути корисним контроль повноти інтеграції. Особливий інтерес у цьому зв'язку являє собою трансформація клітин рослин із застосуванням мінімальної конструкції експресії гена згідно з, наприклад, європейським патентом № ЕРІ407000В1, включеним в дану заявку за допомогою посилання з даною метою. Методики, добре відомі фахівцям у даній області техніки, можна застосовувати для введення конструкцій нуклеїнової кислоти та векторів у клітини рослин для одержання трансгенних рослин, що мають ознаки, описані в даній заявці. Трансформація агробактеріями являє собою спосіб, широко застосовуваний фахівцями в даній області техніки для трансформації видів рослин. Одержання стабільних і фертильних трансгенних рослин на сьогоднішній день є рутинним у даній області техніки (див., наприклад, публікації Toriyama, et al. (1988) Bio/Technology 6, 1072-1074; Zhang, et al. (1988) Plant Cell Rep. 7, 379-384; Zhang, et al. (1988) Theor Appl Genet 76, 835-840; Shimamoto, et al. (1989) Nature 338, 274-276; Datta, et al. (1990) Bio/Technology 8, 736-740; Christou, et al. (1991) Bio/Technology 9, 957-962; Peng, et al. (1991) International Rice Research Institute, Manila, Philippines 563-574; Cao, et al. (1992) Plant Cell Rep. 11, 585-591; Li, et al. (1993) Plant Cell Rep. 12, 250-255; Rathore, et al. (1993) Plant Molecular Biology 21, 871-884; Fromm, et al. (1990) Bio/Technology 8, 833-839; Gordon-Kamm, et al. (1990) Plant Cell 2, 603-618; DDHalluin, et al. (1992) Plant Cell 4, 1495-1505; Walters, et al. (1992) Plant Molecular Biology 18,189-200; Koziel, et al. (1993) Biotechnology 11,194-200; Vasl, I. K. (1994) Plant Molecular Biology 25,925-937; Weeks, et al. (1993) Plant Physiology 102, 1077-1084; Somers, et al. (1992) Bio/Technology 10, 1589-1594; WO92/14828; Nilsson, O. et al (1992) Transgenic Research 1, 209-220). Інші способи, такі як балістична трансфекція або бомбардування мікрочастинками (US 5100792, ЕР-А-444882, ЕР-А-434616), електропорація (ЕР 290395, WO 8706614), мікроін'єкція (WO 92/09696, WO 94/00583, ЕР 331083, ЕР 175966, Green et al. (1987) Plant Tissue and Cell Culture, Academic Press), безпосереднє поглинання ДНК (DE 4005152, WO 9012096, US 4684611), поглинання ДНК, опосередковане ліпосомами (наприклад, Freeman et al. Plant Cell Physiol. 29: 1353 (1984)), або спосіб із застосуванням вортекса (наприклад, Kindle, PNAS U.S.A. 87: 1228 (1990d)) можуть бути переважними, якщо трансформація агробактеріями є малоефективною або неефективною, наприклад, у деяких видів голонасінних. Огляд фізичних способів трансформації клітин рослин наведений у публікації Oard, 1991, Biotech. Adv. 9:1-11. Як альтернатива, для збільшення ефективності процесу трансформації можна застосовувати комбінацію різних методик, наприклад, бомбардування мікрочастинками, покритими агробактеріями (ЕР-А-486234), або балістичну трансфекцію для утворення ушкоджень і наступного спільного культивування з агробактеріями (ЕР-А-486233). Після трансформації рослину можна регенерувати, наприклад, з окремих клітин, тканини калюса або листових дисків, що є стандартом у даній області техніки. Практично будь-яку рослину можна повністю регенерувати із клітин, тканин та органів рослини. Огляд доступних методик наведений у керівництвах Vasil et al., Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vol I, II and III, Laboratory Procedures and Their Applications, Academic Press, 1984 та Weissbach and Weissbach, Methods for Plant Molecular Biology, Academic Press, 1989. Конкретний вибір технології трансформації буде визначатися ефективністю такої технології трансформувати певні види рослин, а також досвіду та переваг особи, що реалізує даний винахід на практиці, і конкретною кращою методологією. Фахівцю очевидно, що конкретний вибір системи трансформації для введення нуклеїнової кислоти в клітини рослин не є важливим для даного винаходу або не є обмежуючим даний винахід, як і вибір методики для регенерації рослини. Після трансформації клітину рослини, яка експресує білок DA1 з порушеним LIM, можна виявити та/або відібрати. Рослину можна регенерувати із клітини рослини. Відповідно до інших варіантів реалізації даного винаходу можна ввести мутацію у послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує білок DA1, у геномі клітини рослини, внаслідок чого нуклеїнова кислота буде кодувати білок DA1 з порушеним LIM. Наприклад, можна ввести мутацію у послідовність, що кодує LIM-домен або LIM-подібний домен білка DA1. Потім з мутантної клітини можна регенерувати рослину. Нуклеїнову кислоту, що кодує білок DA1, можна піддати мутації за допомогою вставки, заміни або делеції одного або декількох нуклеотидів у порівнянні з нуклеотидною послідовністю дикого типу. Наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 або більше нуклеотидів можуть бути змінені у порівнянні з нуклеотидною послідовністю дикого типу з метою інактивувати кодований LIM- або LIM-подібний домен. Мутації інактивують або нокаутують LIM-домен та/або LIM-подібний домен і перебувають переважно в області послідовності нуклеїнової кислоти, що кодує LIM-домен або LIM-подібний домен. Переважні мутації не викликають зрушень рамки зчитування. Методики мутагенезу, інактивації або нокауту цільових генів добре відомі в даній області техніки (див., наприклад, керівництва In Vitro Mutagenesis Protocols; Methods in Molecular Biology (2nd edition) Ed Jeff Braman; Sambrook J et al. 2012. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (4th Edition) CSH Press; Current Protocols in Molecular Biology; Ed Ausubel et al (2013) Wiley). Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу мутації в цільову послідовність, що кодує DA1, можна ввести із застосуванням методик геномного редагування, наприклад, методик на основі нуклеази, що направляє РНК, така як методика на основі CRISPR (clustered regularly interspaced short palindromic repeats – короткі паліндромні повтори, регулярно розташовані групами), методик на основі нуклеаз "цинкових пальців" (zinc-finger nucleases, ZFN) і ефекторних нуклеаз, подібних до активаторів транскрипції (transactivator-like effector nucleases, TALEN) (Urnov, F.D. et al Nature reviews. Genetics 11, 636-646 (2010); Joung, J.K. et al. Nature reviews. Molecular cell biology 14, 49-55 (2013); Gasiunas, G. et al PNAS USA 109, E2579-2586 (2012); Cong, L. et al. Science 339, 819-823 (2013)). Рослину, яка експресує білок DA1 з порушеним LIM, описаний вище (тобто білок DA1 з інактивованим або порушеним LIM-доменом або LIM-подібним доменом), можна розмножити статевим шляхом або вегетативно або виростити для одержання нащадка або потомства. Нащадок або потомство рослини, регенерованої з однієї або декількох клітин, можна розмножити статевим шляхом або вегетативно або виростити. Рослину або її нащадка або потомство можна схрестити з іншим рослинами або саму з собою. Рослину або її нащадка або потомство можна досліджувати на предмет розміру насіння, розміру органів і/або врожайності рослин у порівнянні з контролями. У рослини, яка експресує білок DA1 з порушеним LIM, описаній у даній заявці, може спостерігатися збільшений розмір насіння й/або органів у порівнянні з контролями, і така рослина може характеризуватися більшою врожайністю. Ефект домінантно-негативних алелей DA1 на пов'язані з врожайністю ознаки рослин є посиленим у рослин, які є дефіцитними за експресією або активністю EOD1 (Li et al (2008), WO2009/047525). Білок DA1 з порушеним LIM можна експресувати, як описано вище, у рослини, що є дефіцитною за експресією або активністю EOD1. Білки EOD1 являють собою убіквітин-лігази ЕЗ рослин (Disch et al. (2006), Li et al (2008), WO2009/047525). Білки EOD1 містять домен EOD. Домен EOD рослин може складатися з амінокислотної послідовності SEQ ID NO: 37: (E/K)RCVICQ(L/M)(K/R/G/T/E)Y(K/R)(M)(G/K)(D/N/E)(R/O/K/L)Q(VM/V)(K/N/T/A)L(L/P)C(K/S)H(V/A)YH(S/T/G/A)(E/Q/D/S/G)C(I/G/T/V)(S/T)(K/R)WL(G/T/S)INK(V/I/A/K)CP(V/I)C(SEQ ID NO: 37) Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу білок EOD1 може містити домен EOD, що містить амінокислотну послідовність залишків з 150 по 192 SEQ ID NO: 38, залишків з 187 по 229 SEQ ID NO: 39, залишків з 192 по 234 SEQ ID NO: 40, залишків з 189 по 231 SEQ ID NO: 41, залишків з 194 по 236 SEQ ID NO: 42, залишків з 194 по 236 SEQ ID NO: 43, залишків з 194 по 236 SEQ ID NO: 44, залишків з 195 по 237 SEQ ID NO: 45, залишків з 189 по 231 SEQ ID NO: 46, залишків з 195 по 237 SEQ ID NO: 47, залишків з 195 по 237 SEQ ID NO: 48, залишків з 195 по 237 SEQ ID NO: 49, залишків з 218 по 260 SEQ ID NO: 50, залишків з 196 по 238 SEQ ID NO: 51, залишків з 197 по 239 SEQ ID NO: 52 або залишків з 193 по 235 SEQ ID NO: 53. Додаткові підходящі послідовності домена EOD можна виявити із застосуванням стандартних методик аналізу послідовності, описаних у даній заявці (наприклад, Simple Modular Architecture Research Tool (SMART); EMBL Heidelberg, DE). Білок EOD1, експресія або активність якого зменшена в клітині рослини, експресуючій білок DA1 з порушеним LIM, може містити амінокислотну послідовність відповідно до будь-якої з SEQ ID NO 38-53, викладених у таблиці 2. Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу білок EOD1 може містити амінокислотну послідовність SEQ ID NO: 45 (AtEOD1) або SEQ ID NO: 50, або 51 (OsEOD1) або може являти собою варіант даної послідовності, що зберігає активність убіквітин-лігази Е3. Білок EOD1, що являє собою варіант будь-якої з SEQ ID NO: 38-53 або іншої еталонної послідовності EOD1, може містити амінокислотну послідовність, яка характеризується ідентичністю послідовності щонайменше 20 %, щонайменше 30 %, щонайменше 40 %, щонайменше 50 %, щонайменше 60 %, щонайменше 70 %, щонайменше 80 %, щонайменше 90 %, щонайменше 95 % або щонайменше 98 % еталонної послідовності EOD1. Білок EOD, що являє собою варіант будь-якої з SEQ ID NO: 38-53, може додатково містити домен EOD, що містить послідовність SEQ ID NO: 37. Приклади підходящих послідовностей викладені вище. Нуклеїнова кислота, яка кодує білок EOD1, може містити нуклеотидну послідовність, викладену в записі бази даних, яку вибирають з групи, що включає ХМ_002299911.1 GI:224059639 (PtEOD1); ХМ_002531864.1 GI:255582235 (RcEOD1); XM_002279758.2 GI:359487285 (VvEOD1); XM_003542806.1 GI:356548934 (GmEOD1a); ХМ_003540482.1 GI:356544175 (GmEOD1b); XM_002468372.1 GI:242042044 (SbEOD1); NM_001147247.1 GI:226496788 (ZmEOD1); або NP_001030922.1 GI:79316205 (AtEOD1; At3g63530), або може являти собою варіант однієї з даних послідовностей. Відповідно до деяких переважних варіантів реалізації даного винаходу нуклеотидна послідовність, що кодує білок EOD1 у рослини, може кодувати AtEOD1 або OsEOD1 або може являти собою варіант зазначених послідовностей. Білки EOD1 і кодуючі нуклеїнові кислоти, експресія або активність яких може бути зменшена, як описано в даній заявці, можна легко виявити у будь-якому виді рослин, що представляють інтерес, зокрема, у культурній рослині, такій як пшениця, ячмінь, маїс, рис та інші сільськогосподарські рослини, із застосуванням загальноприйнятих методик аналізу послідовності. Підходящі способи зменшення експресії або активності EOD1 добре відомі в даній області техніки. Наприклад, активність E0D1 можна зменшити, переважно усунути, за допомогою введення мутації, такої як делеція, вставка або заміна, у положення, яке відповідає положенню 44 в SEQ ID NO: 45, наприклад, за допомогою заміни А на Т. Положення у послідовності білка EOD1, еквівалентне положенню 44 в SEQ ID NO: 45, можна виявити із застосуванням стандартних аналізів послідовності та інструментів вирівнювання. Відповідно до деяких варіантів реалізації даного винаходу експресію білка EOD1 можна зменшити в клітинах рослини за допомогою експресії гетерологічної нуклеїнової кислоти, що кодує або транскрибує супресорну нуклеїнову кислоту, наприклад, супресорну молекулу РНК або РНКі, у клітинах зазначеної рослини. Супресорна РНК придушує експресію білка EOD1 у клітинах рослини, що експресує DA1 з порушеним LIM. Підходяща послідовність РНКі може відповідати фрагменту еталонної нуклеотидної послідовності EOD1, викладеної в даній заявці, або може являти собою варіант зазначеної послідовності. Відповідно до інших варіантів реалізації даного винаходу в послідовність нуклеїнової кислоти, що кодує білок EOD1, у геном клітини рослини можна ввести нокаут- або нокдаун-мутацію, у результаті якої експресія або активність EOD1 зменшується. Потім з мутантної клітини можна регенерувати рослину. Нуклеїнову кислоту, що кодує EOD1, можна піддати мутації за допомогою вставки, заміни або делеції одного або декількох нуклеотидів у порівнянні з нуклеотидною послідовністю дикого типу. Наприклад, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 або 10 або більше нуклеотидів можуть бути змінені у порівнянні з нуклеотидною послідовністю дикого типу. Білки DA1 з порушеним LIM можна експресу вати, як описано в даній заявці, у будь-якому виді рослин. Приклади рослин, що підходять для застосування відповідно до будь-якого аспекту даного винаходу, описаному в даній заявці, включають однодольні та дводольні вищі рослини, наприклад, сільськогосподарські або культурні рослини, такі як рослини, які вибирають з групи, що включає Lithospermum erythrorhizon, Taxus spp, тютюн, гарбуз, моркву, овочеву культуру роду Капуста, диню, перець однолітній, виноград, салат, полуницю, олійну культуру роду Капуста, цукровий буряк, пшеницю, ячмінь, маїс, рис, сою, горох, сорго, соняшник, помідор, картоплю, перець, хризантему, гвоздику, льон, коноплі та жито. В іншому аспекті даного винаходу запропонована трансгенна рослина, яка експресує білок DA1 з порушеним LIM, як описано вище. Рослина може містити екзогенну нуклеїнову кислоту, що кодує білок DA1 з порушеним LIM. Одна або декілька ознак рослини, пов'язаних із врожайністю, можуть бути поліпшені, збільшені або посилені в рослині у порівнянні з контрольними рослинами, які не експресують білок DA1 з порушеним LIM. Пов'язані з врожаєм ознаки можуть включати тривалість життя, розмір органу та розмір насіння. Рослина може мати збільшену врожайність у порівнянні з контрольними рослинами дикого типу (тобто ідентичними рослинами, які не експресують білок DA1 з порушеним LIM). Наприклад, маса насіння (наприклад, зерен) або іншого продукту рослинного походження на одиницю площі може бути збільшена у порівнянні з контрольними рослинами. Підходяща рослина може бути отримана за допомогою способу, описаного вище. Крім рослини, отриманої за допомогою способу, описаного в даній заявці, даний винахід охоплює будь-який клон такої рослини, насіння, самозапилення або гібридне потомство та нащадків, а також будь-яку частину або пагін, що служить для вегетативного розмноження, кожного із зазначених об'єктів, такі як черешки та насіння, які можна застосовувати для відтворення або статевого або вегетативного розмноження. Також даний винахід охоплює рослину, що являє собою нащадка, отриманого в результаті статевого або вегетативного розмноження, клон або нащадка такої рослини, або будь-яку частину або пагін, що служить для вегетативного розмноження, зазначеної рослини, нащадка, клону або потомства. Рослина згідно з даним винаходом може являти собою рослину, що не здатна передавати одну або декілька ознак потомству. Можуть бути виключені різновиди рослин, особливо різновиди рослин, реєстровані відповідно до правил реєстрації нових сортів рослин (Plant Breeders Rights). "Та/або" у даній заявці варто інтерпретувати як конкретну вказівку на кожну з двох зазначених ознак або компонентів у сполученні з іншим або без іншого. Наприклад, "А та/або В" варто інтерпретувати як конкретну вказівку на кожний з (і) А, (іі) В та (ііі) А і В так, ніби кожний з даних варіантів був зазначений у даній заявці індивідуально. Якщо контекст не диктує зворотнє, описи та визначення властивостей, викладених вище, не обмежені ніяким конкретним аспектом або варіантом реалізації даного винаходу, і застосовуються еквівалентно до всіх описаних аспектів і варіантів реалізації. Всі документи, що згадують у даній специфікації, включені в дану заявку за допомогою посилання у всій своїй повноті для всіх цілей. Зміст всіх записів баз даних, що згадують у даній специфікації, також включений в дану заявку за допомогою посилання у всій своїй повноті для всіх цілей. Такі записи включають версії будь-якої послідовності, які існують на дату подачі даної заявки. Експерименти 1. Методи 1.1 Аналіз коімунопреципітації Всі білки-принади для даних досліджень були позначені GST (глутатіон-S-трансферазою), і гранули глутатіон-сефарози (GE Life Science 17-0756-01) використовували для афінної адсорбції даних білків. У колбу, яка містить 10 мл середовища LB з відповідними антибіотиками, інокулювали штам BL21 з відповідною експресуючою конструкцією у вихідному розчині гліцеролу та залишали вирощувати протягом ночі при температурі 37 °C і при 220 об./хв. На наступний ранок 10 мл прекультури використовували для інокуляції в колбу, яка містить LB об'ємом 100 мл (у співвідношенні 1:100), і дану культуру інкубували при температурі 37 °C протягом двох годин при 220 об./хв. Колбу виймали з інкубатора, додавали IPTG (ізопропілтіогалактозид, Melford MB 1008) до кінцевої концентрації 1 мМ, після чого інкубували культуру при температурі 28 °C (і 220 об./хв.) протягом ще трьох годин. Після даної фази росту культури центрифугували при 4500g протягом 10 хвилин, супернатанти відкидали, і осад ресуспендували при температурі 4 °C в 2,5 мл буфера TGH (50 мМ HEPES (рН 7,5), 150 мМ NaCl, 1 % Triton-X-100, 10 % гліцерол, 1 мМ DTT (дитіотреїтол), 1 таблетка повного інгібітора протеази, який не містить EDTA (complete EDTA-free protease inhibitor, на 50 мл, Roche 11873580001)). Потім бактеріальну суспензію обробляли ультразвуком (на льоді) протягом чотирьох циклів тривалістю по десять секунд, розділених інтервалами по 20 секунд, після чого центрифугували при 12000 g протягом 20 хвилин, щоб осадити весь клітинний дебрис. Виділені зразки після обробки ультразвуком зберігали на льоді, поки не була приготовлена 50 % суспензія промитих гранул глутатіон-сефарози (GE Life Sciences 17-0756-01) відповідно до інструкцій виробника. Потім 20 мкл 50 % суспензії глутатіон-сефарози поєднували з 2,5 мл екстракту білка із клітин, експресуючих білок-приманку (мічений GST), і з 2,5 мл екстракту білка із клітин, експресуючих білок-здобич (мічений HA-/FLAG-/HIS). Дану суміш інкубували протягом 30 хвилин при температурі 4 °C на обертовому столі, після чого гранули глутатіон-сефарози промивали п'ять разів надлишком (500 мкл) буфера TGH (відповідно до інструкцій виробника). Після промивання білки елюювали 35 мкл буфера для елюювання GST (50 мМ TRIS-гліцин (рН 8,0), 10 мМ відновленого глутатіону) протягом більше 30 хвилин при температурі 4 °C з наступним аналізом методом вестерн-блоттингу. 1.2 Вестерн-блоттинг 20 %, 12 % або 4-20 % заздалегідь приготовлені SDS-поліакриламідні гелі (RunBlue NXG02012, NXG01227, NXG42027) занурювали у буфер для аналізу RunBlue SDS-TRIS-трицин (RunBlue NXB0500) у резервуарах для гелю (Atto Japan AE6450). Зразки змішували з 2х буфером для зразка Лемлі (Bio-Rad Ltd 161-0737), що поміщали в термоблок при температурі 96 °C протягом 10 хвилин, а потім наносили у промиті лунки в гелі в аліквотах по 10 мкл або 20 мкл. Гелі аналізували при 160 В протягом 60 хвилин разом з аліквотою попередньо пофарбованої "драбинки" маркерів молекулярної маси PageRuler Plus Prestained Protein Ladder, від 10 до 250 кДа (Fermentas 26619) об'ємом 3 мкл. При необхідності, на даній стадії гелі офарблювали. Перенос проводили із застосуванням набору Bio-Rad Mini Trans-Blot® Cell (Bio-Rad 170-3836). Гелі видаляли із скляного каркаса та клали зверху на губку (з набору Bio-Rad Mini Trans-Blot® Cell), два листи хроматографічного паперу (VWR WHAT3030-917) і промиту метанолом PVDF (полівініліденфторидну) мембрану (Roche Diagnostics 03010040001). Пухирці повітря між гелем і мембраною видаляли, після чого на гель клали два додаткових листи ватманського паперу і губку, і всю отриману конструкцію закривали в контейнері для втримання гелю (з набору Bio-Rad Mini Trans-Blot® Cell), занурювали у буфер для переносу (25 мМ TRIS, 192 мМ гліцин, 10 % (об./об.) метанол) і витримували при 90 В протягом 70 хвилин при температурі 4 °C. Після переносу мембрану промивали протягом 10 хвилин в 50 мл ФБР (фосфатний буферний розчин, 140 мМ NaCl, 2,7 мМ KСl, 10 мМ Na2HPO4, 1,8 мМ KН2РО4, рН 7,3) при кімнатній температурі та струшували в 50 мл блокуючого розчину (5 % (мас./об.) сухе молоко, 0,1 % (об./об.) Tween-20) протягом однієї години при кімнатній температурі або протягом ночі при температурі 4 °C. Первинні антитіла розводили у блокуючому розчині до відповідної концентрації (див. таблицю 2.9) та інкубували з мембраною (10 мл на мембрану при легкому перемішуванні) протягом однієї години перед п'ятьма промиваннями 50 мл ФБР (ФБР із Tween, 140 мМ NaCl, 2,7 мМ KСl, 10 мМ Na2HPO4, 1,8 мМ KН2РО4, 0,1 % (об./об.) Tween-20, рН 7,3) при кімнатній температурі. Якщо було потрібне вторинне антитіло, етапи фарбування та промивання повторювали. Промиту мембрану тримали пінцетом й акуратно промокували один кут на промокальному папері, щоб видалити надлишок вологи. Потім мембрану поміщали в чашку Петри та обробляли субстратом пероксидази (SuperSignal West FEMTO Max. Sensitivity substrate (Fisher Scientific PN34095)) у кількості 800 мкл субстрату на мембрану. Мембрани залишали в даному субстраті на п'ять хвилин, висушували, як описано раніше, і поміщали в рентгенівську касету для плівок під лист рентгенівської плівки (Fuji Film X-RAY, 18 x 24 см (FujiFilm 497772RXNO)). Рентгенівську плівку проявляли із застосуванням настільної проявляючої машини для рентгенівських плівок Konica SRX-101 (Koniсa 106931659). При необхідності, після проведення аналізу мембрани промивали в 50 мл ФБРТ та офарблювали 10 мл розчину Ponceau S (Sigma-Aldrich P7170) протягом 30 хвилин після одного промивання в 50 мл ФБРТ і висушували при кімнатній температурі. 1.3 Визначення розміру насіння Площу насіння використовували як репрезентативний показник розміру насіння. Насіння розкидали в чашці Петри та сканували проти білого фона із застосуванням настільного сканера (Hewlett Packard ScanJet 4370) при високій роздільній здатності (<3600 точок на дюйм). Зображення зберігали у вигляді чорно-білих зображень розміром 8 біт, і аналіз зображень проводили із застосуванням програмного забезпечення Image. Відкривали програму Image і встановлювали поріг (Ctrl+Shift+T) так, щоб все насіння було повністю червоним, потім вибирали все насіння за допомогою інструмента "прямокутного вибору" і вибирали варіант аналізу (Analyze > Analyze Particles). У діалоговому вікні встановлювали розмір порога, щоб виключити з аналізу менші (відмінні від насіння) структури та великі структури, такі як агрегати насіння. Довжину та ширину насіння розраховували за допомогою підгонки овалу до кожного насіння (Analyze > Set measurements > Fit ellipse). При виборі даного варіанта аналіз видає "Більше" і "Менше" значення, що відповідає довжині та ширині овалу, представляючи найбільш довгу та найбільш широку частини насіння. [J1] 2. Результати LIM-домени (Prosite: PS00478) являють собою тандемні домени "цинкового пальця", які виступають як платформа для білок-білкових взаємодій (фіг. 1). За допомогою програмного забезпечення для прогнозування доменів, доступного в мережі інтернет (Pfam, SMART, PROSITE), була спрогнозована наявність одного LIM-домена в DA1 (амінокислоти (АК) 170-230 AtDAl), що, як передбачалося, залучений в опосередкування передбачуваної гомодимеризації DA1-DA1 (Li et al., 2008). Однак несподівано було виявлено, що при введенні pace Col арабідопсису варіант DA1 з мутантним LIM-доменом (надалі позначуваний "DA1lim8") викликає домінантний негативний фенотип розміру органа, еквівалентний мутанту da-1 (фіг. 4). Отримані результати демонструють, що LIM-домен DA1 не залучений у гомодимеризацію DA1. Для одержання мутанта DAllim84 ключові амінокислоти, які координують цинк (С172, С175, С199 і С202), перетворювали в гліцин. Згідно з прогнозом, дані мутації усувають мотив "цинкового пальця", що утворюється в результаті координації Zn ділянками залишків цистеїну (С). Рекомбінантні білки-принади, мічені GST, інкубували з рекомбінантним білками-здобиччю, міченими FLAG, з наступною преципітацією мічених GST білків-принад на гранулах глутатіон-сефарози. Потім очищені білки елюювали та проводили аналіз методом електрофорезу в поліакриламідному гелі з додецилсульфатом натрію та імуноблотингу. Здатність β-глюкуронідази (GUS) утворювати гомотетрамер використовували для одержання позитивного контролю GST-GUS у порівнянні з FLAG-GUS. Також використовували два набори негативних контролів, які являли собою GST-GUS у порівнянні з FLAG-видобуток та GST-принада у порівнянні з FLAG-GUS. Дані експерименти з коімунопреципітації in vitro продемонстрували, що Dallim8 здатний сполучатись з білком DA1 дикого типу (фігура 3), і що фенотип розміру насіння lim8 у раси Сol еквівалентний такому для da1-Ι (фігура 4). Потім послідовності білків DA1 аналізували із застосуванням двохетапного аналізу прогнозування доменів. Спочатку проводили початковий скринінг для виявлення гомології (HHpred) з метою виявлення білків з подібними доменами та структурами. Після цього проводили скринінг для прогнозування доменів (Pfam, SMART, PROSITE), при якому дані білки використовували як шукану послідовність. Дана стратегія дозволила встановити, що область амінокислот 230-297 AtDA1 має значну структурну гомологію з LIM-доменами інших білків (включаючи білок LHX3 LIM/гомеобокса миші). Даний новий передбачуваний домен був названий LIM-подібним доменом. Передбачувана друга пара амінокислот, що координують цинк в LIM-подібному домені DA1, не була виявлена із застосуванням класичного програмного забезпечення для прогнозування доменів (Pfam, SMART, PROSITE) внаслідок значного відхилення послідовності від канонічної ділянки LIM. При аналізі спарювання СххН у положенні амінокислот 261-264 у послідовності AtDA1 було очевидно, що вставка у перший домен "цинкового пальця" і міжпальцеву область викликає значне відхилення послідовності від консенсусної ділянки LIM, у результаті чого довжина "пальця" становить 24 АК і довжина міжпальцевої області становить 7 АК (замість 16-23 АК та 2 АК, відповідно). Внаслідок цього LIM-подібний домен являє собою другий "цинковий палець", який містить LIM-домен у межах білка DA1. Таблиця 1. Вирівнювання білків DAI (SEQ ID NO: 4-27) Таблиця 2 (SEQ ID NO 38-53) ПЕРЕЛІК ПОСЛІДОВНОСТЕЙ <110> Plant Bioscience Limited <120> Способи моделювання розміру насіння та органів у рослин <130> NRS/LP7065238 <150> GB 1319876.7 <151> 2013-11-11 <160> 54 <170> Patentin version 3.3 <210> 1 <211> 66 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: LIM-домен <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2)…(3) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)…(27) <223> Хаа у положеннях 5-27 являє собою будь-яку амінокислоту, та до семи із них можуть бути відсутні; являє собою діапазон 16-23 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (28) … (28) <223> Хаа являє собою His або Cys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (29)… (32) <223> Хаа у положеннях 29-32 являє собою будь-яку амінокислоту, або будь-які дві із них можуть бути відсутні; являє собою ланцюжок із 2 або 4 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (33)…(33) <223> Хаа являє собою Cys, His або Glu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (34)…(35) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (37)…(38) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (40)…(60) <223> Xaa у положеннях 40-60 являє собою будь-яку амінокислоту, та до семи із них можуть бути відсутні; являє собою діапазон 14-21 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (61)…(61) <223> Хаа являє собою Cys або His <220> <221> ВАРІАНТ <222> (62)…(64) <223> Хаа у положеннях 62-64 являє собою будь-яку амінокислоту, та будь-яка одна або дві з них можуть бути відсутні; являє собою ланцюжок із 2 або 1, або 3 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (65)…(65) <223> Хаа являє собою Cys, His, Asp або Glu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (66)…(66) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <400> 1 <210> 2 <211> 63 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: LIМ-домен <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2)…(3) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)…(27) <223> Xaa у положеннях 5-27 являє собою будь-яку амінокислоту, та до семи з них можуть бути відсутніми; являє собою діапазон 16-23 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (29)…(30) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (32)…(33) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (35)… (36) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (38)… (58) <223> Хаа у положеннях 38-58 являє собою будь-яку амінокислоту, та до семи з них можуть бути відсутніми; являє собою діапазон 14-21 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (60)… (61) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (63)…(63) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <400> 2 <210> 3 <211> 53 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 3 <210> 4 <211> 504 <212> PRT <213> Setaria italica <400> 4 <210> 5 <211> 487 <212> PRT <213> Brachypodium distachyon <400> 5 <210> 6 <211> 514 <212> PRT <213> Brassica rapa <400> 6 <210> 7 <211> 532 <212> PRT <213> Brassica rapa <400> 7 <210> 8 <211> 532 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 8 <210> 9 <211> 478 <212> PRT <213> Theobroma cacao <400> 9 <210> 10 <211> 474 <212> PRT <213> Glycine max <400> 10 <210> 11 <211> 478 <212> PRT <213> Glycine max <400> 11 <210> 12 <211> 462 <212> PRT <213> Vitis vinifera <400> 12 <210> 13 <211> 482 <212> PRT <213> Vitis vinifera <400> 13 <210> 14 <211> 486 <212> PRT <213> Solanum lycopersicum <400> 14 <210> 15 <211> 878 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 15 <210> 16 <211> 486 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 16 <210> 17 <211> 512 <212> PRT <213> Brachypodium distachyon <400> 17 <210> 18 <211> 491 <212> PRT <213> Brachypodium distachyon <400> 18 <210> 19 <211> 486 <212> PRT <213> Sorghum bicolor <400> 19 <210> 20 <211> 508 <212> PRT <213> Zea mays <400> 20 <210> 21 <211> 553 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 21 <210> 22 <211> 528 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 22 <210> 23 <211> 1613 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 23 <210> 24 <211> 450 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <:400> 24 <210> 25 <211> 702 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 25 <210> 26 <211> 644 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 26 <210> 27 <211> 587 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 27 <210> 28 <211> 73 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: LIM-подібний домен <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2)…(3) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)… (27) <223> Хаа у положеннях 5-27 являє собою будь-яку амінокислоту, та до семи з них можуть бути відсутніми; являє собою діапазон 16-23 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (29)…(35) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (37)… (38) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (40)…(46) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (49)…(49) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (51)…(69) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (71)…(72) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <400> 28 <210> 29 <211> 73 <212> PRT <213> штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: LIM-подібний домен <220> <;221> ВАРІАНТ <222> (2)…(2) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)… (27) <223> Хаа у положеннях 5-27 являє собою будь-яку амінокислоту, та до семи з них можуть бути відсутніми; являє собою діапазон 16-23 амінокислот. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (32) … (34) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (38) … (38) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (40)…(46) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (53)… (53) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (55)…(59) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (61)…(62) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (64)…(64) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (66)…(66) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (68)… (68) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (71)…(72) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <400> 29 <210> 30 <211> 66 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: LIM-подібний домен <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2)… (2) <223> Хаа являє собою Asp, Glu, Туr або His <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)…(6) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (7)…(7) <223> Хаа являє собою Phe або Lys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (8)…(8) <223> Хаа являє собою lie, Lys або Phe <220> <221> ВАРІАНТ <222> (9)… (9) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою Pro або Ser <220> <221> ВАРІАНТ <222> (10)…(10) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою Thr, Arg або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (11)…(11) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою Asn або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (12)… (13) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (14)… (14) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою Gly <220> <221> ВАРІАНТ <222> (15)… (15) <223> Хаа являє собою Leu, lie, Met або Gly <220> <221> ВАРІАНТ <222> (16)…(16) <223> Хаа являє собою Arg, Lys або Ilе <220> <221> ВАРІАНТ <222> (17) … (17) <223> Хаа являє собою Glu, Gly, Lys або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (18)… (18) <223> Хаа являє собою Туr або Phe <220> <221> ВАРІАНТ <222> (19)…(19) <223> Хаа являє собою Arg, His, Ser, Asn або Lys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (20)…(20) <223> Хаа являє собою Ala, Cys, Glu, He або Asn <220> <221> ВАРІАНТ <222> (25) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (26)…(26) <223> Хаа являє собою Gln або Glu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (27) … (27) <223> Хаа являє собою Lys, Thr або Arg <220> <221> ВАРІАНТ <222> (31)…(31) <223> Xaa являє собою Phe, Val, He, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (33)…(33) <223> Xaa являє собою Glu або Asp <220> <221> ВАРІАНТ <222> (34)… (34) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (36)…(36) <223> Хаа являє собою Gly, Lys, Arg, Ser або Ala <220> <221> ВАРІАНТ <222> (38).. (38) <223> Xaa являє собою Pro, Thr або Ala <220> <221> ВАРІАНТ <222> (39)…(39) <223> Xaa являє собою Arg або Lys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (46)…(46) <223> Xaa являє собою Met або Leu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (48) … (48) <223> Xaa являє собою Pro, Ser або His <220> <221> ВАРІАНТ <222> (49)…(52) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (54)…(55) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (57) … (57) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (59)…(59) <223> Хаа являє собою Gly, Phe або Asn <220> <221> ВАРІАНТ <222> (61)…(61) <223> Хаа являє собою Arg, Lys, Ser або Trp <220> <221> ВАРІАНТ <222> (64)… (64) <223> Xaa являє собою Leu, Arg або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (65)… (65) <223> Xaa являє собою Glu або Lys <400> 30 <210> 31 <211> 66 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 31 <210> 32 <211> 5 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: мотив активного сайта металопептидази <400> 32 <210> 33 <211> 19 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: мотив карбоксикінцевої, області <220> <221> ВАРІАНТ <222> (3)…(10) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (12)…(15) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <400> 33 <210> 34 <211> 18 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: мотив карбоксикінцевої області <220> <221> ВАРІАНТ <222> (3)…(10) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (12)…(15) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <400> 34 <210> 35 <211> 21 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: домен UIM1 <220> <221> ВАРІАНТ <222> (1)…(1) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2)… (4) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)…(5) <223> Хаа являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (7)…(7) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (8) … (8) <223> Xaa являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад Glu, Phe, His, Ile, Lys, Met, Gln, Arg, Trp або Туr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (10)…(10) <223> Xaa являє собою залишок аліфатичної амінокислоти, наприклад lie, Leu або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (11).. (11) <223> Хаа являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gln, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (12)… (12) <223> Xaa являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад Glu, Phe, His, Ilе, Lys, Met, Gln, Arg, Trp або Туr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (13)…(13) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою будь-яку амінокислоту. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (15)… (15) <223> Xaa являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад Glu, Phe, His, lle, Lys, Met, Gln, Arg, Trp або Туr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (16)…(16) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gln, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (17)…(17) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (18) … (18) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою будь-яку амінокислоту. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (19)…(21) <223> Хаа являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <400> 35 <210> 36 <211> 21 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: домен UIM2 <220> <221> ВАРІАНТ <222> (1).. (1) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gln, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2) … (4) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5).. (5) <223> Хаа являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gln, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (7)… (7) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (8) … (8) <223> Xaa являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад, Glu, Phe, His, lle, Lys, Met, Gin, Arg, Trp або Туr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (10)…(10) <223> Xaa являє собою залишок аліфатичної амінокислоти, наприклад. Не, Leu або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (11)…(11) <223> Хаа являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (12)…(12) <223> Xaa являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад, Glu, Phe, His, Ilе, Lys, Met, Gin, Arg, Trp або Туr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (13)…(13) <223> Може бути присутнім або відсутнім. У випадку наявності, Хаа являє собою будь-яку амінокислоту. <220> <221> ВАРІАНТ <222> (15)…(15) <223> Хаа являє собою залишок великої амінокислоти, наприклад, Glu, Phe, His, Ilе, Lys, Met, Gln, Arg, Trp або Туr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (16)…(16) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gin, Arg, Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (17) … (17) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (18) … (18) <223> Хаа являє собою залишок невеликої амінокислоти, наприклад, Ala, Cys, Asp, Gly, Asn, Pro, Ser, Thr або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (19)…(21) <223> Xaa являє собою залишок полярної амінокислоти, наприклад, Cys, Asp, Glu, His, Lys, Asn, Gln, Arg, Ser або Thr <400> 36 <210> 37 <211> 43 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: домен EOD рослин <220> <221> ВАРІАНТ <222> (1) … (1) <223> Xaa являє собою Glu або Lys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (8)…(8) <223> Xaa являє собою Leu або Met <220> <221> ВАРІАНТ <222> (9)…(9) <223> Xaa являє собою Lys, Arg, Gly, Thr або Glu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (11)…(11) <223> Xaa являє собою Lys або Arg <220> <221> ВАРІАНТ <222> (12)… (12) <223> Xaa являє собою Arg або lle <220> <221> ВАРІАНТ <222> (13)…(13) <223> Xaa являє собою Gly або Lys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (14)… (14) <223> Xaa являє собою Asp, Asn або Glu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (15)…(15) <223> Xaa являє собою Arg, Gin, Lys або Leu <220> <221> ВАРІАНТ <222> (17)…(17) <223> Xaa являє собою lie. Met або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (18) … (18) <223> Xaa являє собою Lys, Asn, Thr або Ala <220> <221> ВАРІАНТ <222> (20)…(20) <223> Xaa являє собою Leu або Pro <220> <221> ВАРІАНТ <222> (22)… (22) <223> Xaa являє собою Lys або Ser <220> <221> ВАРІАНТ <222> (24)… (24) <223> Xaa являє собою Val або Ala <220> <221> ВАРІАНТ <222> (27)…(27) <223> Xaa являє собою Ser, Thr, Gly або Ala <220> <221> ВАРІАНТ <222> (28)…(28) <223> Xaa являє собою Glu, Gln, Asp, Ser або Gly <220> <221> ВАРІАНТ <222> (30)…(30) <223> Xaa являє собою lie, Gly, Thr або Val <220> <221> ВАРІАНТ <222> (31)…(31) <223> Xaa являє собою Ser або Thr <220> <221> ВАРІАНТ <222> (32)…(32) <223> Xaa являє собою Lys або Arg <220> <221> ВАРІАНТ <222> (35)… (35) <223> Xaa являє собою Gly, Thr або Ser <220> <221> ВАРІАНТ <222> (39)…(39) <223> Xaa являє собою Val, lle, Ala або Lys <220> <221> ВАРІАНТ <222> (42)…(42) <223> Xaa являє собою Val або Ilе <400> 37 <210> 38 <211> 203 <212> PRT <213> Populus trichocarpa <400> 38 <210> 39 <211> 240 <212> PRT <213> Ricinus communis <400> 39 <210> 40 <211> 245 <212> PRT <213> Prunus persica <400> 40 <210> 41 <211> 242 <212> PRT <213> Theobroma cacao <400> 41 <210> 42 <211> 247 <212> PRT <213> Vitis vinifera <400> 42 <210> 43 <211> 247 <212> PRT <213> Glycine max <400> 43 <210> 44 <211> 247 <212> PRT <213> Glycine max <400> 44 <210> 45 <211> 248 <212> PRT <213> Arabidopsis thaliana <400> 45 <210> 46 <211> 243 <212> PRT <213> Capsella rubella <400> 46 <210> 47 <211> 249 <212> PRT <213> Sorghum bicolor <400> 47 <210> 48 <211> 253 <212> PRT <213> Zea mays <400> 48 <210> 49 <211> 249 <212> PRT <213> Zea mays <400> 49 <210> 50 <211> 272 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 50 <210> 51 <211> 250 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 51 <210> 52 <211> 251 <212> PRT <213> Brachypodium distachyon <400> 52 <210> 53 <211> 246 <212> PRT <213> Solanum lycopersicum <400> 53 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Штучна послідовність <220> <223> Синтетична послідовність: мотив LIM-домена <220> <221> ВАРІАНТ <222> (2)…(3) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (5)…(6) <223> Xaa являє собою будь-яку амінокислоту <220> <221> ВАРІАНТ <222> (8)…(9) <223> Хаа являє собою будь-яку амінокислоту <400> 54

ОФІЦІЙНІ ФАЙЛИ

Документи реєстрового запису

5

УЧАСНИКИ

Власники, заявники та автори

12

Власники прав

ПБ
ПЛАНТ БІОСАЙЄНС ЛІМІТЕДGB
ПБ
ПЛАНТ БИОСАЙЕНС ЛИМИТЕДGB
PB
PLANT BIOSCIENCE LIMITEDGB

Заявники

ПБ
ПЛАНТ БІОСАЙЄНС ЛІМІТЕДGB
ПБ
ПЛАНТ БИОСАЙЕНС ЛИМИТЕДGB
PB
PLANT BIOSCIENCE LIMITEDGB

Винахідники

БМ
Беван МайклGB
БМ
Бэван МайклGB
BM
Bevan, MichaelGB
ДД
Дюменіль ДжекGB
ДД
Дюмэниль ДжэкGB
DJ
Dumenil, JackGB

Адреси учасників показані лише до рівня країни, області та населеного пункту — без вулиці й номера будинку.

ДІЛОВОДСТВО ТА БІБЛІОГРАФІЯ

Повна історія реєстрового запису

  1. Патент зареєстровано
  2. Підготовка до державної реєстрації та публікації
  3. Очікування документа про сплату державного мита
  4. Кваліфікаційна експертиза
  5. Очікування клопотання про проведення кваліфікаційної експертизи
  6. Формальна експертиза
  7. Встановлення дати подання
  8. Реєстрація первинних документів, попередня експертиза та введення відомостей до бази даних
Вид документаI_12
Патент України (на 20 р.)
Код виду документаI_13
C2
Установа публікаціїI_19
UA
Дата початку дії правI_24
2026-06-25
ПріоритетI_30
GB · 1319876.7 · 2013-11-11
Публікація заявкиI_43.D
2020-02-25
Бюлетень заявкиI_43_bul_str
4/2020
Офіційний бюлетеньI_45_bul_str
25/2026
Попередній рівень технікиI_56
2 · 3 · JP 2005185101 A, 14.07.2005
Додаткові бібліографічні відомостіI_98
м. Київ

ПЕРШОДЖЕРЕЛО

Офіційний запис

Інформація має довідковий характер. Для юридично значущої перевірки використовуйте офіційний реєстр.